香蕉愈伤组织诱导影响因素的探究.pdfVIP

园艺学进展(第六辑) 香蕉愈伤组织诱导影响因素研究 徐春香梁铨荣彭国康 陈厚彬 (华南农业大学园艺学院，广州510642) 摘要以香蕉的未成熟雄花为外植体，接种至以MS为基础的多种培养基上进行培养，研究 了2，4-D等培养基成分及培养条件对愈伤组织诱导率的影响。结果表明：外植体在2，4-D浓度为4 “19／L时可以获得较高的胚性愈伤组织诱导率，2。4-D浓度太低时愈伤组织诱导率偏低，而浓度过 高导致绝大多数外植体死亡}培养条件对愈伤组织的产生有一定的影响，黑暗条件下培养时能获得 较高的愈伤组织诱导率，在含有活性炭的培养基中不能诱导产生愈伤组织。 关键词香蕉f雄花；愈伤组织诱导 香蕉(Musaspp．)主要栽培品种均为3倍体，不能产生种子，因而不能通过传统的杂交育 种方式培育品质好、抗性强的优良新品种。近年来植株基因工程技术的发展为香蕉的育种提供 了新的选择。但以茎尖为受体的遗传转化所获得的转化材料通常都是基因嵌合体。香蕉的胚 Cell 性细胞悬浮系(EmbryogenicSuspension，ECS)是基因工程的良好受体，可以克服上述 缺点，从而大幅减少甚至避免嵌合体的产生[1’2]。愈伤组织是建立ECS的起始材料，因此愈伤 组织的诱导率的高低直接影响遗传工程的工作效率。前人曾就不同的接种部位口一1及接种时 期Ⅲ等因素对香蕉愈伤组织诱导率的影响进行了研究。本文以我国主栽香蕉品种‘巴西蕉’为 试验材料，研究了2，4-D等培养基成分及培养条件对愈伤组织诱导率的影响。 1材料与方法 1．1供试材料 供试材料为我国主栽香蕉品种‘巴西蕉’(MusaAAA)的未成熟雄花，采自广东番禺。 1．2外植体接种 香蕉的花序完全抽出后取其上部的未成熟雄花进行常规灭菌，将其顶端长1～2IllIn左右 的花序接种于以下各种MI系列诱导培养基(表1)上进行培养。除MI一4培养基设光照培养和 持续黑暗培养两个处理外，其余均为持续黑暗培养。每处理3次重复，每重复8瓶，每瓶接种3 h，光照强度为4500lx。 2结果和分析 2．1愈伤组织的诱导 以接种在MI一4诱导培养基上的雄花外植体的培养过程为例。未成熟雄花接种1～2周后 开始膨大，1个月后小花因膨大而变得圆胖，约5周后，开始出现细小的黄绿色紧密的颗粒状 分生小球体，接种3～5个月后，分生小球体的直径约为0．5～2．0mm(图l—A)，分生小球体是 雄花经诱导后获得的最主要的愈伤组织。除分生小球体外，还有黄色或白色、结构紧密的愈伤 基金项目：华南农业大学校长基金(5300-K02082)；广东省科技攻关项目(2002A208010102)。 果 树 组织，黄白色半透明、透明、松软而富含水分的愈伤组织等多种其他类型的愈伤组织。黄白色、 松脆透明的胚性愈伤组织在接种后约4个月后才开始出现在分生小球体的表面，随着时间的 延长，胚性愈伤组织逐渐增殖且多数会在表面出现体胚(图1一B)。 袁l各种诱导培养基的组成成分 1 11Ie ofiⅡducfionmedia TaMe com删60n mg／L A B 豳1分生小球(A)和胚性愈伤组织(B) calI鹏(B) Flg．1Me．sterile窖lobllI嚣(A)andEmbryo窖eⅡic 2．2 2，4_D浓度对愈伤组织诱导的影啦5L 外植体接种至诱导培养基上5个月后，培养基中的2，4一D浓度不同，其愈伤组织诱导情况 也有所不同：当2，4-D的接种浓度为1‘Ilg／L时，所获得的愈伤组织多数体积膨大(约为外植 体大小的10～20倍)、结构疏松，外植体褐化致死比例较少}随着2，4一D浓度的增加，愈伤组织 的体积减小，外植体褐化致死比例也逐渐上升。受z，4-D接种浓度的影响，各类愈伤组织的诱 导率也发生变化(图z)。从图中可以看出：虽