辽宁绒山羊细管冷冻精液的探究.pdfVIP

，。。囝 2004学术年会 辽宁绒山羊细管冷冻精液研究 张世伟s，宋先忱，朱延旭，刘兴伟 辽宁省辽宁绒山羊原种场，辽宁盖州115224 摘要：本试验比较系统地研究了辽宁绒山羊细管冷冻精液的稀释液及制作_T-艺。结 果表明，离心洗涤去精清可以提高冷冻一解冻后的精子活力，与不去精清的对照组相比 差异显著(P0．05)；以等体积乙二醇替代甘油作防冻剂制作的细管冷冻精液，解冻后 的精子活力和顶体完整率显著高于甘油作防冻刺的对照组(P0．05)。筛选稀释液配方 的试验还证明，含Tris的柠檬酸盐缓冲液对提高冷冻后精子活力与硕体完整率具有良好 的作用。 关键词：畜牧学；冷冻精液；精清；乙二醇；辽宁绒山羊 山羊精液冷冻保存国外在二十世纪七十年代中期开始研究，我国在其后的八十年代开始了山羊 颗粒冻精的制作，进入九十年代，特别是波尔山羊的引进，山羊冻精的研究报导越来越多。据波尔 山羊冷冻精液质量监测结果，目前，国内山羊冷冻精液的解冻后活力达30％以上，情期受胎率在60％ 左右。 辽宁绒山羊原种场在上个世纪八、九十年代研制和应用绒山羊颗粒冻精的基础上，于2000年开 始对辽宁绒山羊细管冷冻糟液的稀释液、精液处理、冷冻工艺、解冻方法及受胎效果等作了比较系 统的研究，取得了较好的成果。’ 1试验材料 1．1精液来源 本研究的绒山羊精液来源于本场核心群的6只公羊，平均射精量1．05ml，精子密度21．86亿^1ll 活力在70％以上。根据试验分组需要，采用混精后再等分于各组中。 1．2试验药品 分析纯无机盐类、糖类及醇类，卵黄、抗菌素等(详见稀释液配方表) 1．3主要器械 光学显微镜、离心机、超低温温度仪等。 2试验研究内容与方法 2．1稀释液配方筛选 2．1．1稀释液化学药品配方本试验的基础液化学药品配方如表1所示。 +作者简介：张世伟(1968——)；男，辽宁绒山羊原种场研究员，从事绒山羊育种与繁殖技术研究 2004学术年会囝561 2．1．2稀释液配制各配方基础液所用化学药品精确称量，混合加双蒸水搅拌、热溶消毒，配成 l液，用于两次稀释处理的第1次稀释。Ⅱ液：在1液中加5％(V／V)甘油即构成Ⅱ液，用于两次 稀释处理的第2次稀释。 2．1．3糟液的稀释、降温平衡、灌装与冷冻采出的新鲜精液在34。C水浴控制下用I液作1：2等温 入0．25ml细管，在．95℃±5℃温区内冷冻3min后投入液氮。 2．1．4细管冻精的解冻与质量评定冻后的细管精液在400水浴解冻，按常规方法检查解冻精子活 力、精子存活时闻，用姬姆萨染色法测定精子顶体完整率。 2．1．5应用乙二醇作防冻剂与一次稀释的效果试验分为四组：A组为甘油作防冻剂，两次稀释； B组为甘油作防冻剂一次稀释；C组乙二醇作防冻剂一次性稀释：D组7,--醇作防冻剂两次稀释。 一次稀释在精液采出后34℃等温稀释，两次稀释II液均在4℃下加入，稀释液采用筛选出的最佳 配方。比较各组间解冻后的精液品质。 2．2细管冷冻精液制作工艺 2．2．1离心洗涤去糟清精液的冷冻效果取新鲜混合精液lml加入等温的2．9％柠檬酸钠液4ml，在 两组精液冷冻一解冻后的精液品质。 2．2．2降温平衡对糟液质量的影响降温速率与精液冷冻的效果：采得的精液用含7__,醇的稀释液作 等温一次稀释。记录34(2降至4C的时间，其余处理同前，分析降温速率对精液冷冻效果的影响。 4h的冷冻效果。 2．2．3冷冻速率与冻糟质量灌装后4C的0．25IIll细管平放于铜纱锣上，用液氮蒸汽熏蒸法冷冻。 ℃，分批冷冻以细管精液冻透至呈黄白色为准，分析初冻温度即冷冻速率对细管冻精质量的影响。 562 2004学术年会 2．3解冻升温速率对细管冻精质量的影响 的时间。分析解冻时升温的速率与细管冻精质量的关系。 2．4细管冻精的受胎试验 2001年开展配种受胎试验以检测细管冷冻精液的质量。0．25ml细管冻精标准：解冻后精子活力 5ml处。每次发情输精两次，间隔 50％以上，有效精子数5X107个；输精部位于子宫颈口内1—1 10～12h。 2．5试验结果采用SPSS软件进行统计分析 3结果与分析 3．1稀释液配方筛选 从15个配方中经过8次试验筛选出5个较好的配方