鸭瘟弱毒Cha株不同途径免疫雏鸭在体内分布与排泄规律的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物徽生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) 鸭瘟弱毒Cha株不同途径免疫雏鸭在体内分布和排泄规律的研究+ 程安春，汪铭书．刘菲，宋涌，袁桂萍，韩晓英，徐超，廖永洪 (四川农业大学动物科技学院禽病研究中心，四川，雅安，625014) 应用聚合酶链反应(PCR)检测鸭瘟病毒(DPV)弱毒CHa株经皮下、口服和滴鼻 三种途径免疫1日龄雏鸭在体内分布和排泄规律。CHa株免疫雏鸭后对血液、心、肝、 脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌头、肌肉、 骨髓、粪便和食道共19种组织PCR检测结果表明：①皮下接种雏鸭第4h，即可在心、 肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑和小脑共lO种组织中检出DPV的DNA， 8h后所有采取的组织器官均可检测到DPV的DNA；②ISI服接种雏鸭第4h可在舌头和食 道中检测到DPV的DNA，8h后可在心、肝、脾、肾、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、 舌头、食道和血液共12组织器官中检出DPV的DPV；③滴鼻接种雏鸭第4h未能在各种 组织中检出‘DPV的DNA，8h后可在心、肝、脾、肾、胸腺、延脑、大脑、小脑、舌头、 食道和血液共11中组织中检测到DPV的DNA。④在三种免疫途径中．检出时间最早和 检出率最高的组织器官为肝脏、脑(大脑、小脑和延脑)，三种免疫途径的鸭从12h至第 21天均能所有采组织中检测出DPVDNA。鸭瘟病毒弱毒株在雏鸭体内的分布规律．为 临床上更好地应用鸭瘟病毒弱毒株预防鸭瘟提供了有力的理论依据。 关键词PCR，检测，鸭瘟弱毒，分布，雏鸭 告有该病的发生。黄引贤等(1957)在我国发现鸭瘟，现在该病在世界和我国各养鸭地 Plaguevirus，DPV)，自然条件DPV 区均有发生和流行【2】。该病的病原是鸭瘟病毒(Duck 除引起鸭的急性败血性传染病。还可可引起多种水禽如野鸭、鹅、天鹅等等严重发病， 其发病率和死亡率都甚高，是水禽养殖业的一大危害口一1。鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭是控制鸭 瘟的非常有效的措施之一，但对其免疫发生发生机理并不清楚。本研究应用敏感性高、 特异性强的PCR对DPV弱毒CHa株经不同途径免疫1日龄雏鸭后在体内分布和排泄规 律进行了检测．结果如下。 1材料和方法 1．1实验病毒株及实验鸭(j)DPV·Cha疫苗株，由本实验室经鸡胚传代致弱获得；②1日 ‘基金项目：四川省杰出青年学科带头人基金后续赞助项目(编号：0320026—028) 作者简介：程安春(1965一)，男，贵州省长顺县人，博士．教授．博士生导师，从事动物传染病教学 和研究工作． Tel：0835-288554艟882754(Fax)： E-mail：Chenganchun@Hotmail．corn或Anchun@Sicau．edu．cn 286 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) 龄天府肉鸭，其上一代母鸭经过鸭瘟弱毒疫苗免疫，母源抗体参照程安春等[5】报道的 ELISA方法检测抗体滴度为I：32一I：64，来源于雅安某孵化场。 10×PCR each批号为220902)均购自上海生工生 buffer(批号为0203B)、dNTP(10mM 128)购自华美生物工程公司， 物工程有限公司，10mg／ml蛋白酶K(批号为VX592368 葡萄糖．10mMEDTA，25mMTris．HCI EDTA 500mmol／L 加入14ml冰醋酸和25ml pH8．0，用冰醋酸调节pH到8．0，定容到500m1) EDTA Tris．HCI，0．1mM 用时稀释至1x。TE(10mM pH8．0)，4℃存放。 I片段设 1．3引物设计与合成针对GenBank中DPV基因组中高度保守的765．bpECOR