视神经炎患者外周血CD3%2bT细胞内细胞因子地研究.pdfVIP

视神经炎患者外周血CD3+T细胞内细胞因子的研究 北京同仁医院神经内科 秦朝晖 余华峰指导 研究背景 NeuritiS，ON) ●视神经炎(OptiC 是一组造成急性、亚急性视力减退的视路疾病。因其发病率高，发病年龄轻，致盲、致残严重，正 日益受到国内、外学者的关注。 ●视神经炎(oN)与多发硬化(Ms)的关系：MRI；CSF：HLA。 ●0N与MS关系密切，0N可能为Ms的顿挫型。 ●0N与细胞免疫：0N可能与Ms一样均为自身免疫性疾病，免疫细胞功能异常，免疫分子分泌失衡，导致 0N的发生。免疫调节网络中，促炎性细胞和促炎性细胞因子作用重要。肿瘤坏死因子一Q(TNF—a)和Y一干 扰素(IFN—Y)。 研究现状 ●目前国内、外，对MS免疫学发病机制研究较多： MS患者血清及CSF中TNF-a显著增高与病情相关；与血脑屏障(BBB)的受损程度密切相关。 培养MS的PBMC及CSFTc克隆的上清液中，发现大量IFN-Y分泌。 ●目前国内、外，对0N相关的免疫学研究，尚未见报道。 变化规律及相互关系。对比活动期和缓解期及肝冲击疗法治疗前、后TNF-Q和IFN—Y的变化。深入探讨TNF— Q和IFN—Y在oN免疫病理过程中的作用。进一步研究激素治疗的免疫学作用原理。 不含谷氨酰胺的；无菌无叠氮钠的。 培养体系： 0．5ml： 莫能霉素3uM；BFA10ug／ml。 单克隆抗体： ●细胞表面抗体：CD3-PerCP 购自Becton-Dickinson公司；CatalogNO．340431；lml ●细胞内细胞因子抗体 (1)TNF—d—PE购自Becton—Dickinson公司；CatalogNO．340512：lml NO．340449：iml (2)IFN—Y—FITC购自Becton—Dickinson公司；Catalog ●阴性对照荧光标记：192G卜PE／IgG卜FITC NO．340485：Iml 购自Becton—Dickinson公司；Catalog 流式细胞仪检测细胞内细胞因子： 和细胞内两种细胞因子进行三荧光抗体染色； 经流式细胞仪从单细胞水平检测cD3+T细胞内多种细胞因子的表达，这样可以更客观，更直接地反映机体 细胞免疫的状况。 表细胞内流式分析法的优点 优点 细胞内漉式分析法 传统生物分析法的局限 快速 实验全程8小时 实验全程需3-10天 实际操作时间I-2小时 简便 全血分析无需分离PBMC 需分离PBMC需细胞培养 无需细胞培养 安全 减少样本处理 多重样本处理 与生物源性污染 有些方法使用放射性物质 应用广泛 ．多参数结果，加快研究进程 结果为整个群体分泌数值 可在确定功能活性的同时 不能区分单个细胞或细胞亚群的反 确定每个细胞的型别 应 灵敏 荧光标记检测系统 碱性磷酸酶或其它酶联检测系统 高灵敏度 灵敏度低 接近生物 全血检测 需将PBMC分离悬浮于组织