体外诱导骨髓来源单个核细胞分化为淋巴管内皮细胞地研究.pdfVIP

第三届中国抗癌协会癌症康复与姑息治疗专业委员会大会 墓础研究 暨2006年上海癌症康复与姑息治疗专业委员会年会 图6 CD31、GFP表达 图7 CD45、CDl33表达 体外诱导骨髓来源单个核细胞分化 为淋巴管内皮细胞的研究 00070 中国人民解放军第二军医大学附属长征医院肿瘤科2 郭子姬王杰军骆益宙于观贞 【摘要】 目的体外分离C57BL／B7小鼠骨髓单个核细胞，建立诱导分化淋巴管内皮细胞的方法，并进行生物学鉴 一210— 第三届中国抗癌协会癌症康复与姑息治疗专业委员会大会 暨2006年上海癌症康复与姑息治疗专业委员会年会 l嗣11．tR-究 定。 方法利用密度梯度离心法分离C57BL／B7小鼠骨髓单个核细胞，在体外经血管内皮细胞生长因子c 光镜进行形态学鉴定，应用荧光免疫组化方法检测淋巴管内皮细胞表面特异性标志。 结果光镜下细胞单层融合生长，呈铺路石样形态，单个核位于中央。荧光显微镜可见到摄取荧光低密 度脂蛋I刍(Dil-Ac—LDL)和UEA 阳性表达的细胞。 结论采用密度梯度法分离的骨髓单个核细胞可以在体外诱导分化成淋巴管管内皮细胞。 [关键词】 骨髓淋巴管内皮细胞诱导分化 —●I●—JLl 阐舌： 目前的研究已经明确肿瘤血管新生过程中存在两种机制，即血管形成(angiogenesiS)和血管生成 干细胞来源的血管内皮祖细胞(endothelialprogenitor 究者成功分离并证实人类出生后的外周循环血液中存在来源于骨髓能分化为血管内皮细胞的血管内皮前体 细胞(EPC)，它可以被动员、募集到新生血管部位，参与成年机体的血管生成191，并且证实，在多种疾病状 态下(肿瘤、心梗等)内皮前体细胞被动员并参与病理和生理情况下的血管新生【101。由于缺乏特异性的淋 巴内皮细胞表面标志，肿瘤淋巴管的研究显著滞后于血管形成。近几年的研究发现，肿瘤细胞可以过表达 生淋巴管内皮细胞的来源不清楚，是否肿瘤淋巴管形成与血管的形成存在很大的相似性——也是由原有淋 巴管出芽和内皮祖细胞定向分化两部分组成仍是个疑问。本研究在体外诱导人骨髓来源的内皮祖细胞向淋 巴内皮细胞分化成熟，旨在证实骨髓来源的内皮祖细胞具有分化为淋巴内皮细胞的能力。 1．材料和方法： 1．1动物s试荆： 司)、VEGF和bFGF(购自PEPEROTECHEC公司)、EGF(购自UPATATE公司l Cruz 3兔抗鼠多克隆抗体均购自Santa 荧光二抗(均购自KPL公司)；DMEM培养基、胎牛血清均购自Gibco公司。 1．2方法： kU／L 骨，剔除肌肉以及纤维结缔组织。以手术剪刀咬去股骨两端骨皮质，暴露骨髓腔，用PH7．4的1250 min；吸 上清，加入PBS溶液重悬至6mL，小心地叠加在6mL的淋巴细胞分离液上，4℃，9009，离心30 取淋巴细胞分离液中间悬浮的单核细胞，用PBS重悬，离心，将细胞重复洗涤2次，弃去上清液。 10 2．5 加入3mL和lmL含有20％胎牛血清的M199内皮细胞培养基(VEGFng／mL、bFGFng／mL、VEGF． ～211～ 第三届中国抗癌协会癌症康复与姑息治疗专业委员会大会 墓础研究