干细胞因子与其受体在儿童再生障碍性贫血中的作用研究.pdfVIP

EIll0． 干细胞因子及其受体在儿童再生障碍性贫血中的作用研究 王军1冯建飞1赵雪莲‘王伟2胡豫2孟晓晖1王宏1 1郑州大学第三附属医院 (郑州450052)E—mail：Swanlgun@371．net 2华中科技大学同济医学院附属协和医院 (武汉430030) 背景 anemia，AA。简称再障)是由多种因素引起的骨髓造血功能衰 再生障碍性贫血(aplastic 竭，而骨髓造血受一些因子及其受体的调控，其中造血干细胞因子(SCF)和其受体C—Kit是作用于 最早期多能造血干细胞的因子，其与儿童再障发病机制间的关系，至今国内未见报道。我们应用 应用免疫细胞化学和核酸分子原位杂交技术，检测再障患儿与正常儿童骨髓SCF和其受体C—Kit 基因蛋白和mRNA的表达水平，以探讨造血干细胞因子及其受体蛋白和mRNA的表达与儿童再障 发病机制间的关系。目的 本研究以再障患儿、正常足月新生儿、正常儿童作为研究对象，通过 ELISA法检测再障患儿血浆正常足月新生儿脐血血浆可溶性C—kit受体(sCDl17)及SCF水平， 并与正常儿童进行比较；提取再障患儿骨髓中单个核细胞，应用免疫细胞化学、核酸分子原位杂交及 及SCF在儿童再障发病机制中的作用。方法 1．ELISA法：取正常足月薪生儿脐静脉血、再障患 儿及正常儿童外周静脉血3～5ml，抗凝，离心取上清，采用双抗体夹心法测定血浆中干细胞因子 离心法分离出单个核细胞，涂片，4％聚甲醛(含I％oDEPC)固定，应用免疫细胞化学和核酸分子原位 杂交技术，结果观察采用计算机图像病理分析系统进行半定量分析，测定再生障碍性贫血患儿与正 X 常对照者c—kk蛋白和mRNA的表达水平。3．用lmlTrizol试剂提取1106细胞总RNA，然后逆 染色)进行电泳，紫外照相并进行扫描分析。结果 (1)SCF在再障患儿组、正常儿童组、新生儿脐 血组分别为363．55±134．3lpg／ml、468．24±147 85ng／ml，再障患 常儿童组、新生儿脐血组分别为13．02±6．16ng／ml、16．81±5．51ng／ml、19．03±5 77±8．09、0．61±3．71，CAA、 细胞表达值(A)在CAA、8AA和正常对照组分别为0，47±6．02、0 (1)再障患儿血浆SCF水 患儿的年龄、性别、发病年龄、临床分型等因素有关(P均O．05)。结论 平低于正常儿童，可能由于再障骨髓基质细胞的数量减少而造成SCF分泌量下降；(2)再障患儿司溶 性c—kit水平低于正常儿童，而再障患儿造血干／祖细胞表面e—kit受体表达正常，提示再障患儿可 溶性c—kit水平降低可能由于造血干／祖细胞数量减少导致可溶性c—kit生成减少；(3)正常足月新 生儿脐静脉血血浆可溶性c—kit及SCF均高于再障儿童，支持正常足月新生儿脐静脉血含有更原始 常儿童组、新生儿脐血组的浓度水平相一致，提示可溶性c—kit通过与SCF结合来调节或阻止SCF 刺激造血细胞生长的能力；(5)c—kit受体与儿童再生障碍性贫血发病无关，但其结构及功能有待进 一步研究；(6)s{^F在儿童再生障碍性贫血治疗中具有良好的临床应用前景。 EIIll． 免疫相关性再生障碍性贫血CD4+T淋巴细胞 抑制消减杂交文库的建立 郑邈刘文励付劲蓉孙汉英周剑锋 华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科 (武汉430030) E—mail：jxiao@tjh．tjmu．edu．al 目的 探讨免疫相关性再生障碍性贫血(再障)CD4+T淋巴细胞异常增殖、活化、浸润骨髓及 引起造血细胞损伤的分子机制。方法 1．采集获得性