腹腔降温对心肺复苏后兔海马神经损伤的影响研究.docVIP

腹腔降温对心肺复苏后兔海马神经损伤的影响研究 　　亚低温能改善心肺复苏（cardiopulmonaryresuscitation，CPR）自主循环恢复（returnofspontaneouscirculation，ROSC）后患者的出院存活率和神经功能，但实施亚低温的方法繁多，哪一种方法降温更为有效，目前尚无定论[1—3]。目前较为一致的认识是，ROSC后应尽早实施亚低温治疗。研究表明ROSC后将4℃低温液体经腹腔灌注，以类似于腹膜透析的方式，可快速诱导亚低温和维持亚低温[4]，但其有效性如何呢？本文将探讨CPR后腹腔降温法是否较其他降温法对神经元细胞损伤更具有保护作用。 　　1材料与方法 　　1.1动物准备 　　48只新西兰成年大白兔，性别不限，由中山大学实验动物中心提供。动物购进后在SPF级动物房饲养1周，实验前晚禁食不禁水。动物麻醉：戊巴比妥钠（sigma公司，美国）30mg/kg，由耳缘静脉注入，酌情给予1/4的首剂量维持。 　　1.2动物模型的建立 　　按照我们前期的方法建立室颤心搏骤停CPR模型[4—7]。诱发室颤成功的标准为：动脉搏动消失，血压迅速下降，接近0mmHg（1mmHg=0.133kPa），心电图显示室颤波形，持续室颤5min后开始CPR。ROSC的标准为恢复室上性心率，平均动脉压60mmHg持续10min以上。 　　1.3实验分组和温度控制 　　48只新西兰大白兔根据随机数字分为4组，各12只：①常温治疗组（nomothermia，NT）：ROSC后放置在37℃恒温箱内，维持核心温度在正常范围内；②腹膜腔内降温治疗组（peritonealcooling，PC）：ROSC后按照笔者前期研究方法进行诱导亚低温和维持亚低温[4]；③体表降温治疗组（surfacecooling，SC）：ROSC后在体表主要在颈部、腹股沟和胸腹腔周围放置冰块，依据降温情况增减冰块数量[8]；④头部局部降温治疗组（localcooling，LC）：ROSC后仅在头部周围放置冰块。本实验中动物的核心温度鼓膜温度（tympanictemperature，Tymp）的正常范围为（39.5±0.5）℃，目标温度为33～35℃。低温治疗组动物达到目标温度后维持亚低温治疗12h，所有动物均补充生理需要的能量。 　　1.4血生化指标的检测 　　诱导亚低温前、达到目标温度后4、8、12和24h分别取静脉血送中山大学附属第一医院临床生化实验室检测以下指标：K+、Na+、Cl—、Ca2+、阴离子间隙（AG）、二氧化碳结合力（CO2）、渗透压（Osm）和红细胞比积（Hct）。 　　1.5海马CA1区组织学检查 　　ROSC后72h通过过量麻醉的方式处死动物，取海马组织，用4%的福尔马林固定后石蜡切边行NISSL染色和TUNEL法原位细胞凋亡检测（ROCHE公司，美国），在OLYMPUSBX51（OLYMPUS公司，日本）显微镜下观察并拍照，计算每400倍视野下CA1区有活力的神经元细胞数和凋亡神经元细胞数。 　　1.6统计学方法 　　所有数据录入SPSS13.0统计软件包，依据正态检验（Kolmogorov—Smirnov）结果分别用均数±标准差（x±s）或四分位数法表示，依据正态检验结果用单因素方差分析（one—wayANOVA）或秩和检验（Mann—Whitneyrank），多重比较用LSD—t检验，ROSC率的比较用用行×列连表χ2检验，以P0.05为差异具有统计学意义。 　　2结果 　　2.1动物分组及CPR情况 　　每组12只动物，均成功诱发VF，NT、PC、SC和LC组分别有9、10、9和10只动物复苏成功，ROSC率各组间差异无统计学意义。各组动物的基本生理学参数、CPR相关指标如除颤次数（DF—T）、基本生命支持时间（BLS）各组之间差异无统计学意义，每组各有3、5、4和3只动物存活72h，PC法有延长动物存活时间（survivaltime）的趋势，但各组之间差异无统计学意义，见表1。ROSC后各组动物在各观察时间点上组间生化指标之间差异无统计学意义。 　　2.2ROSC后动物体温控制情况 　　诱导亚低温阶段NT组动物鼓膜温度维持在38℃以上，其他三组在实施降温措施后鼓膜温度均迅速下降，其中PC组温度下降最为迅速，达到目标温度的时间为（26±7）min，SC组和LC组达到目标温度的时间分别为（60±9）min，（68.57±12.15）min（图1A），在维持亚低温阶段，除NT组外，其余各组鼓膜温度均稳定的维持在33～35℃之间（图1，B）。 　　诱导亚低温阶段NT组动物鼓膜温度维持在38～39℃之间，达到目标温度的时间PC组为（26±7）min，SC组为（60±9）min，LC组为（69±12）min（A）；维持亚低温阶段，除NT组