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RNA干扰技术及其应用研究进展 孙良文，闫静，孙长江，冯新，张庆明，韩文瑜 吉林大学畜牧兽医学院，吉林省长春市10062 摘要：RNA干扰技术是指把与内源mRNA编码区同源的小片段外源双链RNA导入细胞中，从而使特定基因表达沉默的一 种技术。本文就RNAi作用机制、特点以及应用等做简要综述，以期为RNA干扰技术的广泛应用提供参考。 关键词：RNA干扰；机制；特点；应用 RNA干扰(RNA RNA，dsRNA)介导的同 源mRNA降解现象，是一种序列特异性的转录后基因沉默(post—transcriptionalgene 调节正常基因功能上具有重要作用，且利用该技术对细胞信号转导、细胞凋亡等的研究不断深入。RNAi因 具有特异、高效等优点，已被广泛用于阻断各种基因的表达，在功能基因组研究、基因治疗方面有着广阔 的应用前景。 1 RNA干扰的发展 的同源RNA降解过程。1998年，安德鲁．菲尔和克雷格．梅洛诺首次在秀丽新小杆线虫中证实正义RNA抑制 称为RNAi眨引。 递。近年来，RNAi技术作为基因沉默的有力工具，在抗病毒研究、药物靶基因的筛选、基因治疗和功能基 因组研究等方面的应用得以飞速发展。 2 RNA i作用机制 自RNAi现象发现后，人们通过对线虫、拟南芥、脉孢菌、果蝇的进一步研究揭示了RNAi的作用机制。 RNA induced 聚合酶(RNA—dependent silencingcomplex，RISC)[6]o 研究表明，病毒来源的dsRNA、末端有反向重复序列的转座子产生的发卡结构以及由RdRP作用下产生 对RNAi效率都有不同程度的影响，其干扰机制简述如下。 2．1 方式被切割成21～23nt的3’端有单链尾巴及5’端磷酸化的SiRNA。 基金项目：国家863计划(201IAAIOA210) 作者简介：孙良文(1986年一)，男，硕士，从事兽医微生物与免疫学研究 通讯作者：韩文瑜。E—mail：hanwy@jlu．edu，crl 一5一 第四届中国兽药大会——兽医微生物学、兽医生物制品学学术论坛论文集(2012年) 反义链的引导下有活性的RISC与靶mRNA结合并在核酸内切酶Ago-2的作用下在距离siRNA3’端12个碱 基的位置特异性地切割mRNA，导致RNA降解，完成siRNA介导的RNAi过程呻1。 沉默的dsRNAs，此过程被称为随机降解性聚合酶链式反应(randomdegradative 一步诱发RNAi，从而使PJqAi效应放大，此即为RNAi的循环扩增过程。 3 RNA干扰的生物学意义 3．1 转座子封闭Ketting等发现蠕虫mut一7基因参与RNAi并且与转座子抑制有关n01。转座子具有反向重 复序列，生物体通过此序列产生dsRNA启动PTGS进而抑制转座蛋白酶的产生和转座子的迁移来保持基因组 的完整性和稳定性。 道，为进一步治疗病毒引起的疾病奠定了基础。 3．3参与胚胎发育及生物体正常基因的表达调控许多在RNAi过程中起关键作用的基因在生物体的发育 和生理代谢上也起着十分重要作用u引。研究证实，无脊椎动物和植物中的RNAi机制可抑制侵入宿主体内的 病毒和转座子，减弱和清除其基因毒性作用u4|。在RNAi相关基因突变体的研究表明它们的突变往往造成生 物体发育的变异及代谢的紊乱。从低等生物到高等生物都存在RNAi现象，说明了RNAi可能是基因表达调 控的一种放方式。 4 RNA i的特点 4．1 实现对靶基因的精确沉默。 整合入宿主染色体就能引起长时间的基因沉默。 发挥作用的。 扰效率。 定存在3～4d，半衰期远长于未经化学修饰的反义寡聚核苷酸。 4．6操作简单与探针杂交技术、基因敲除相比，RNA干扰技术操作相对简单且效果明显。 4．7可传播性和可遗传性RNAi抑制基因表达的效应可以在不同细胞间长距离传递和维持。 5干扰RNA类型的选择 RNAi的效应分子主要有两类，即siRNA和短发夹RNA(shorthairpin 和载体表达的shRNA在发挥RNAi效应方面各有优劣，现分述如下：