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载体的构建 目的基因片段的获得 查找目的基因相关信息。 一般在这个网站上（/index.jsp拟南芥信息较全）进行搜索，可以查到目的基因的全基因组序列、cDNA序列和CDs序列（根据实验目的进行选择）。也可以查到与这个基因相关的其它信息。 设计引物 目的基因序列获得之后，现在就需要进行实验将其片段从DNA或cDNA中扩增出来。首先设计引物，一般通过primer premier 5.0或DNAMAN软件进行设计。通过引物的设计，就确定了你将会得到什么样的片段。所以说，引物设计在载体构建中具有重要作用。（引物设计方法这里就不提了，以后在实验过程会慢慢学会） 引物之前酶切位点的选择： 要将目的片段插入到载体中，主要是通过酶切位点的作用。在载体上存在多克隆位点，目的片段中叶存在酶切位点，这就需要我们进行选择。primer premier 5.0软件中可以查找到目的片断中不存在的酶切位点，在通过与载体上多克隆位点进行比较，选择所需要的酶切位点。最后，需要注意的是考虑目的片段插入到载体上后表达会不会移码，否则会改变氨基酸序列。 DNA或cDNA的提取 PCR扩增目的基因 利用上述提取的DNA或cDNA进行PCR扩增目的基因片段。一般的实验步骤如下： 模板