忽地笑叶相关基因表达及克隆分析.pdfVIP

摘要 忽地笑(￡岁Dm以“m口)为石蒜属植物代表种，是优良的观赏植物和药用植物。国内外 学者已经进行了一些研究，主要包括栽培繁育技术、染色体核型分析、重要药用成分提取 等方面，但是有关其遗传发育方面的研究尚未见报道。本文利用基因芯片技术，开展了一 种忽地笑突变体与野生型叶器官之间的基因表达差异分析，为进一步探讨其叶发育分子机 制提供了依据。 忽地笑属平行脉序类型，主脉与各侧脉纵向平行排列，各纵向脉之间有横向二级侧脉 Secondary 相连，一般二级侧脉不显著。本研究所选材料为一种忽地笑突变型，称为Raised Lateral 弱于野生型，叶色暗绿，相对较薄；另外，雄蕊完全退化，成为只有雌蕊的重瓣单性花。 利用表达型噬菌体载体zAP构建了野生型和突变体忽地笑叶片cDNA文库，分别随机 条70mer的特异性序列作为寡核苷酸探针，代表512个基因，点制芯片，对忽地笑野生型 和突变体叶器官进行了基因表达谱分析，比较二者间转录水平上的基因表达差异。芯片实 验结果进一步采用实时定量PCR技术验证，最终确定所检测的基因中，突变型和野生型有 5个基因表达显著差异，包括与维管发育和营养物质运输相关的韧皮部蛋白2基因(pllloem pm晒n ester砸es，P础巳s)基 催化果胶脱酯化，与细胞壁结构和功能相关的果胶甲酯酶(pec血ⅡleⅡlyl 因；以及叶绿素a，b结合蛋白和丙酮酸脱羧酶等。我们进一步采用m虻E方法获得了这几 个基因的全长cDNA序列，并比较了它们在突变体和野生型中的差异。这些基因的表达差 异可能与突变表型的形成和维持相关，根据对这些基因的分析结果，有助于我们从转录水 平上更深入地理解忽地笑叶发育的分子机制以及RsLv突变对叶片代谢及生长发育的影响。 关键词：忽地笑；突变体；基因芯片；叶发育 Gene and eXpressionprofilingcloIlingof矽cD廊以“陀以1eaVes AbstI·act a of af_medecor鲥Veand Herb，is plallt 矽cD门苫以“形d，beillgrepresentatiVespeciesLyc嘶s in cultiVa垃on medicillalhasbc圮nresearched i11cludes曲e breediIlg plant．n m卸yaspects，maillly chr∞∞somenudear fbrmediciⅡal technology，the typean矗【ysis，也e血1po衄ce purposes not wi山drawsandso meresearchabout has on，but aspect yet ingredicnt beillg i忸heredi锣gmwtll bcen me be晰eenarnutaIlt粕d山e coInpaired report甜．IIlⅡlisp印erwe geneexpressionpmfiling