人参皂苷前体工程酵母的构建.pdfVIP

第 4l卷 第 5期 吉 林 大 学 学 报 (工 学 版 ) Vo1．41 No．5 2011年 9月 JournalofJilinUniversity(EngineeringandTechnologyEdition) Sept．2011 人参皂苷前体工程酵母 的构建 梁彦龙 ，赵寿经，徐立新，刘 丽，何沐阳，孙 尧 (吉林大学 生物与农业工程学院，长春 130022) 摘 要：从人参发根中通过 RT—PCR扩增 了人参达玛烯二醇合成酶基 因。并利用这一基因 酵母表达载体 pAUR123构建 了产达玛烯二醇的转基 因酿酒酵母 。阳性克隆经短梗霉素A 性粗筛，并经 PCR、SDS—PAGE和TLC验证。研究结果表 明，这一酵母能够表达人参达玛 二醇合成酶，并产生达玛烯二醇。达玛烯二醇合成酶在整个酵母生长期内均有表达。达玛 二醇合成酶活和达玛烯二醇水平在 YDP液体培养基中培养 36h和 42h时达到最高，分别 132U／g干细胞和 251,ug／L。 关键词 ：生物工程 ；达玛烯二醇合成酶；人参发根 ；酿酒酵母 中图分类号 ：Q812 文献标志码 ：A 文章编号 ：1671-5497(20¨)05—1513—04 Constructionofengineeredyeastproducingginsenosideprecursor LIANGYan-long，ZHAO Shou—jing，XU Li—xin，LIU Li，HEMu—yang，SUN Yao (CollegeofBiologicalandAgriculturalEngineering，JilinUniversity，Changchun130022，China) Abstract：Dammarenediol gene was amplified by RT—PCR from Panax ginseng hairy roots． A engineeredsaccharomycescerevisiaewasconstructed usingthisgeneand theyeastexpressionvector pAUR123．The positive clonewasselected byAureobasidin A resistance，and wasconfirmed by PolymeraseChain Reaction (PCR)，Sodium DodecylSulfate Polyacrylamide GelE1ectrophoresis (SDS—PAGE)andThinLayerChromatography (TLC)．Theresultsshow thattheengineeredyeast 和 抗 烯 烯 为 could express functional dammarenediol synthase and produce dammarenedio1． Dammarenediol synthasewasexpressed throughoutthegrowth phaseoftheengineeredyeast．Thehighestlevelsof dammarenediolsynthaseanddammarenediol(132U／gdriedcellsand251ptg／L)intheengineered yeastwereobservedafter36hand42h growthinliquidYDPmedium ，respectively． Key words：bi。engineering；dammarenediol synthase；panax ginseng hairy roots；saccharomyces cereviSiae 人参皂苷是人参的主要药理活性成分 ，具有 二醇合成酶的催化下合成 。人参生长缓慢 ，对 多种药理活性作用 ，如抗癌 、抗衰老、抗疲劳等Ⅲ 。 条件要求苛刻 ，而人参组织当 中的皂苷含量又很 研究表明，人参皂苷 由其直接前体达玛烯二醇衍 低 ，因此在微生物中异