2009~2011年H9N2亚型禽流感病毒的分子遗传进化分析.pdfVIP

$--届全国禽病分子生物技术青年学者论坛论文集 2009～201 1年H9N2亚型禽流感病毒的分子遗传进化分析 蒲娟，王敏，魏延迪，孙怡朋，包静楠，乌云高娃，孙梦，杜芊，文楚，许冠龙，刘金华· 中国农业大学北京100193 摘要：H9N2亚型禽流感病毒是危害我国养禽业的重要病原，并威胁人类健康。近年来，该亚型病 毒持续在我国鸡群中流行，为了解其分子演化规律，我们进行了2009’2011年H9N2禽流感病毒分离 株的分子遗传进化分析。研究发现，H9N2流感病毒姒及NA基因持续进化，表现出时间相关性，但 是部分毒株的HA基因形成了一个独立的小进化分支。内部基因中，F／98分支源基因占优势：此外， 分离株中出现了水禽源(DK)内部基因，暗示可能发生了水禽与鸡群毒株之间的基因重组。关键氨 合低致病性禽流感病毒的特征；大部分分离株具有7’8个糖基化位点；在受体结合位点，分离株的 190位氨摹酸发生了由A／T到V的变异，这与2008年以后分离株的特点相似：值得注意的是，在抗 原决定簇区域，分离株多发生了由S到R的变异，这是2009’2011年分离株所呈现}n的新特性，可 能影响病毒的抗原性等生物学活性。该研究揭示了2009’2011年H9N2流感病毒的分子遗传进化规律， 为我国H9N2亚型流感的科学防控提供了理论依据。 关键词：禽流感：H9N2亚型；分子遗传进化 1引言 H9N2亚型流感病毒在世界范围内的鸡群中流行n’2’射，引起鸡产蛋率下降¨t引，甚至与其他病原 体共感染而导致鸡群的高死亡率¨’引，给养殖业造成了巨大的经济损失。此外。越来越多的禽H9N2 流行株具有人受体结合特性n，引，并可感染人吼埘，这些事实提示应密切关注该亚型流感病毒的遗传 进化特点及分子流行病学规律。中国被认为是新型流感病毒的“发源地”u¨。H9N2病毒自1994年 首次在我国被分离到以来，在鸡、鸭和多种珍禽(如鹌鹁、雉鸡、鹧鸪、鸽子和珍珠鸡)中被检测 到¨2J引，目前已成为养禽业中主要的流感病毒亚型．基因组研究认为，我国出现的大多数H9N2病毒 部基因表现出多样性，包括Ok(Duck)、Aq(Aquatic 支。禽H9N2流感病毒可感染与传播于猪，导致病毒基因和抗原性发生变异．值得注意的是，许多血 清学调查发现我国有一定比例的人群已经感染过H9N2病毒，血清阳性率高达13．737．2％Ⅲ，IS]o因 此，开展H9N2亚型禽流感病毒的分子遗传进化研究可以为我国禽流感的防控提供重要流行病学资 料，还具有重要的公共卫生学意义。 2009年以来本研究室对我国北京、河北、山东、河南等地区的养殖场进行了流感病毒监测，共 噩型流感病毒的基冈进化特点和规律。 19 第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛论文集 2．材料和方法 2．1病毒 用血凝抑制实验和RT-PCR方法进行病毒的弧型鉴定，所有分离株保存于-70C备用。 2．2序列扩增及测序 利用TRIzol进行病毒RNA的提取，反转录通用引物为Unit12：5’一AGC从AAGCAGG一3’。基因 片段的扩增按照常规方法进行n61，序列测定由北京六合华大基因科技股份有限公司完成。 2．3基冈序列拼接与分析 将测序结果进行拼接和校正，将核苛酸序列翻译成氨基酸序列，分析流感病毒的裂解位点、受 行序列拼接和多序列的比对。 2．4系统进化树分析 对实验测序毒株和NCBI流感数据库中下载的流感序列进行系统进化树的制作，利用MEGA4．1软 support≥ 70％的分支，其对应的基因片段可认为来源相同。 3结果与分析 3．1分离株序列测定 对实验室分离的17株禽H9N2 1271位核苷酸，M：78～947位核苷酸和NS：78～825位核苷酸． 3．2系统进化树分析 为研究H9N2流感病毒近年来在我国的基因遗传进化规律，我们利用从NCBI流感数据库下载的 H9N2流感病毒的8个基因片段序列及本实验分离测定的毒株序列进行系统进化树分析。 3．3表面蛋白摹因 ike(代表株：Qa／HK／G1／97)分支(图IA)，2009’2011年H9N2分离 (代表株：Ck／BJ／1／94)和G卜l 株