诱变育种选育高效产氢细菌.pdfVIP

第28卷第6期 太阳能学报 V01．28．№．6 20cr7年6月 ACIAENERGIAESOLARISSINICA 】llll．．200口 诱变育种选育高效产氢细菌 郑国香，任南琪，林海龙，李永峰 (哈尔滨工业大学市政环境学院，哈尔滨150090) 摘要：从自行研制的cSrm反应器中分离出一株产氢发酵细菌Et}lano】igenemsp．zex4，以其为出发菌株，进行紫 外和亚硝酸复合诱变选育，经过连续传代得到一株遗传稳定性很好的高效产氢突变株Ⅵ03。在培养条件分别为 ￡ 乙醇型发酵代谢类型。高效产氢耐酸突变体Ⅵ03的释氢能力和产氢速率明显高于野生菌株Z(0(4，显示了较强的 商业应用潜力，也可为以后进一步探讨研究乙醇型细菌的制氢机制及代谢途径提供物质材料。 关键词：生物制氢；突变体；紫外线和亚硝酸；产氢能力 中图分类号：X703 文献标识码：A 变方法筛选高效产氢细菌未见报导。本实验针对如 O 引 言 何进一步提高细菌的产氢能力进行了诱变育种研 发酵法生物制氢问世以来，发酵过程中无需光 究。采用紫外和亚硝酸复合诱变的方法对出发野生 照、可实现废物回收、低成本以及无污染等优点，逐 菌Eman01igenens 渐引起学者的关注。但反应系统中发酵细菌的产氢 和稳定性考察后得到一株高效产氢突变菌株YR．3。 能力不高是制约产氢发酵工业发展的影响因素之 一。为解决这一难题，国内外研究者陆续分离和筛 1材料与方法 选菌株以期盼获得高效产氢细菌，如Kur-Ⅲ(2000)从 1．1材料 树叶榨出物中分离到一株阴沟肠杆菌(Enterobacter 1．1．1出发菌株 cloacae)ⅡT-B哟8，在pH6．o和36℃条件下，最大产 出发菌株EtIlan01igenenssp．zG搿由哈尔滨工业 氢速率为29．63Ⅱ朋olH2／g·dryceU·h…；Ren等人 大学环境技术中心提供，革兰氏染色为阳性，代谢类 (2002)从自行研制的C姗的活性污泥中分离到一型为乙醇型厌氧产氢细菌。 株产氢细菌B49，其最大产氢速率在25一一28rnmolH2／g1．1．2液体培养基(g，L) 葡萄糖12，蛋白胨2．0，牛肉膏2．0，酵母汁1．0， ·dryceu·h[2]。以上提到的菌株都是从自然环境中分 NaCl 离到的具有较高产氦能力的野生型细菌。而以人工 4．O，K2Ⅲq 诱变基因突变为基础的诱变育种方法，如利用物理 o．1，MgCl2·6H20 (紫外辐射)和化学(亚硝基胍、亚硝酸等)诱变获得 突变体，一直是发酵工业中的各种优良高产菌株筛 选的主要途径，也是研究微生物生理代谢机制的传 其他成分如液体培养基。 统方法。目前，发酵法生物制氢技术中，发酵产氢细 1．1．3化学试剂 菌突变体获得的方法主要有质子自杀法b’40和烯丙 醋酸缓冲液、亚硝酸钠溶液和磷酸氢二钠溶液 基乙醇方法b’6j，筛出的突变体拥有比野生型更强的 无氧无菌；紫外诱变过程及平板的配制操作及培养 产氢能力。国内外关于应用紫外线和亚硝酸复合诱 在厌氧箱中进行。 收稿日期：2004讲一13 基金项目：国家重点基础技术研究发展计划(973)(G2000026402)； 国家自然科学基金项目 万方数据万方数据 6期