中华白海豚SRAP分子标记多态性的初步研究.pdfVIP

第3l卷第2期 台 湾 海 峡 VoL31．N0．2 2012年5月 JOURNALOFOCEANOGRAPHYINTAIWANSTRAIT May，2012 中华白海豚SRAP分子标记多态性的初步研究 赵丽媛1，陶翠花1，许 敏k2，祝 茜k2 (1．国家海洋局第三海洋研究所，福建厦门361005；2．山东大学威海分校海洋学院，山东威海264209) chinensis) 摘要：首次将SRAP(sequence—relatedamplifiedpolymorphism)方法引入中华白海豚(Sousa DNA聚 多态性研究中，利用高分辨率的毛细管凝胶电泳分析了模板DNA、Mg“、dNTP、引物、Taq 引物对．并进一步确立了适合中华白海豚的SRAP最佳反应体系：25nlm3体系中，模板DNA浓度为 o．8ng／mnl3。M，+浓度为1．0mmol／dm3，dNTP浓度为o．1mmol／dm3，引物浓度为o．2斗mol／dm’， DNA聚合酶浓度为O．04U／mm3．利用该反应体系对10个白海豚样品进行SRAP分析的结果 Taq 表明，不同样品间DNA谱带清晰、多态性丰富．证实该体系稳定可靠，可以用于中华白海豚的分子 标记研究． 关键词：海洋生物学；中华白海豚；SRAP-PCR；优化；多态性；毛细管凝胶电泳 D01：10．3969／J．ISSN．1000．8160．2012．02．007 中图分类号：P735 文献标识码：A chinensis)，也叫印度太平洋列相关扩增多态性)，可以弥补以上各项技术的不 中华白海豚(Sousa 驼背豚(Indo—PacificHump·backedDolphin)，隶属于足之处扣J．它具有共显性、信息完整、重复性和稳定 性好等优点．SRAP标记的原理是通过设计独特的 鲸目(Cetacean)，海豚科(Delphinidae)，白海豚属 frames) (Sousa)．近年来由于对海洋的过度围垦、兴建码头、双引物对基因的开放阅读框(openreading 海洋污染和海上交通等因素．使得适合中华白海豚 的特定区域进行扩增，其标记的正向、反向引物分别 活动的栖息地急剧缩小和破坏，其种群数量也在不 与外显子和内含子(或启动子)区域相配对．而由于 断的下降¨…．中华白海豚已经成为世界上最濒危 不同物种或不同个体的内含子、启动子与间隔区长 的物种之一，它也是我国海洋鲸豚中唯一的国家一 度不同，因此可以产生多态性。”J． 级重点保护野生动物．因此，充分了解其种群的遗传 SRAP技术已被成功地用于多种植物的遗传图 多样性并制定合理的保护措施，对中华白海豚的保 谱的构建和遗传多样性的分析一J，但是在动物方 护生物学具有重要意义． 面，国内外都报道较少．近年来，少数学者也逐步开 近年来，随着分子生物学手段的迅猛发展，出现 了多种用于种群遗传资源的DNA分子标记技术，主 for 要有AFLP、RAPD、SSR、ISSR等．AFLP多态性高，稳筛选。”1．而在哺乳动物的研究中，仅有张敏等 定性好，但实验步骤繁琐，成本高；RAPD操作简单、 费用低，但重复性和稳定性较差；SSR多为共显性标 记，但位点少，引物开发的成本较高Ls]．由此可见， 以上标记各有优势，但均不够理想．2l世纪初，Li等子标记技术对中华白海豚种群进行了遗传多样性研 (2001)开发了一种新型的基于PCR的标记系统究，但至今尚未见SRAP分子标记技术应用于中华 SRA