对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP12的研究.pdfVIP

第32卷第4期 应用海洋学学报 V01．32．No．4 2013年11月 JournalofAppliedOceanography Nov．，2013 1 对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP2的研究 李建波1，邬君君2，杨 丰2 (1．厦门大学海洋与地球学院，福建厦门361005；2．国家海洋局第i海洋研究所，福建厦门361005) 摘要：VPl2是对虾白斑综合症病毒的一种结构蛋白，该蛋白质由病毒基因wsv009编码，分子量为 10．9kDa．转录时相分析表明wsv009属于早期基因．本研究通过PCR扩增获得了该全长基因，成功 重组蛋白制备了特异性鼠抗血清．纯化的病毒粒子经0．5％TritonX—100处理后，VPl2被发现存在 于病毒WSSV的囊膜部分，Westernblot杂交实验和免疫电镜实验也证实该结果．对VPl2的深入研 究将有助于了解病毒的感染和包装的机制，为病毒的诊断和控制提供科学依据． 关键词：海洋生物学；对虾白斑综合症病毒；VPl2；表达；Western杂交；免疫电镜 DOI：10．3969／J．ISSN．2095-4972．2013．04．009 中图分类号：P735 文献标识码：A 对虾白斑综合症病毒(white vi— 结构蛋白的研究，主要在体外进行．通过在体外克隆 spotsyndrome IUS，WSSV)于上世纪90年代初在日本首先爆发并表达病毒的各个结构蛋白，利用蛋白质之间相互作 迅速传播开来．作为对虾的最主要病毒病原之 用的方法来研究不同病毒结构蛋白之间的相互作 一oI-2]，WSSV具有宿主范围广，传染力强，致死率用，进一步阐述病毒的包装、成熟机制．如Jie(2008) 高，难防治的特点．近年来，该病毒虽无大规模爆发， 但是局部范围发病的消息仍时有报道，且发病时死 c．末端能够与VP24发生相互作用¨0。；Xie等 亡率极高，给对虾养殖业造成严重的经济损失，是海 水养殖病害的研究重点之一．之前的研究已经证实， 该病毒是一种纺锤状，不形成包涵体的环状双链 能够分别与VP26和VP24有相互作用，并且认为 DNA病毒．该病毒的基因组约305kb引，具有潜在 VP26能够与核衣壳上的蛋白相互作用一J．在此基础 的531个ORF，其中181个ORF可能具备编码功能 蛋白的功能．本实验室于2005年报道了一种简单有移的方法发现VP26能够与核衣壳蛋白VP51发生 效的从感染螯虾的组织中提取大量完整病毒粒子的 相互作用，这也是第一次发现病毒的膜蛋白与核衣 方法【6o．此方法过程中不包括复杂的密度梯度超速 壳蛋白的相互作用…o；Chen等(2007)发现病毒膜 离心，仅用几步普通的差速离心便可以获得大量的 病毒粒子．并且在电子显微镜下观察，病毒粒子囊膜 结构均完整．在此基础上，通过广泛应用蛋白质组学 了4种病毒的膜蛋白之间的相互作用¨3I；Chang等 的方法，WSSV结构蛋白的鉴定研究取得了很大的 进步‘7引． 目前为止，在已经鉴定的40多种蛋白中，已经 互作用关系。。4。引． 有部分主要的结构蛋白得到了较为详细的研究．由 目前，相关的结构蛋白研究主要是集中于含量 于缺少有效细胞系，对WSSV的研究，尤其是对病毒较高的一些结构蛋白，对于WSSV中含量较少的结 收稿日期：2013-05-20 专项资金资助项目(海三科2009044) 作者简介：李建波(1981～)，男，博士研究生；E-mail：252665416@qq．corn 通讯作者：杨丰，男，研究员；E-mail：yangfen95274@163．tom 万方数据 应用海洋学学报 32卷 构蛋白研究较少．鉴于此，本文对VPl2这个低丰度 结构蛋白进行了初步研究，我们首先对wsv009迸行