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第■部分临床进展 第四部分 科学研究 泻肝法对TS模型鼠自主活动的影响及其作用机制的研究 崔霞卫利吴力群陈自佳郝宏文王素梅 北京中医药大学东方医院 小儿多发性抽动症是一种起病于儿童时期的神经精神疾病。本病在学龄儿 童和青少年中的患病率可达1％Ⅲ，国内报道本病呈上升趋势，且治疗困难， 难治性病例增多乜1。其发病机制目前尚未完全清楚。大多数学者认为TS存在着 中枢神经递质失衡，多种神经递质的异常在本病的发病过程中起着重要的作 用，主要与多巴胺、5一羟色胺和去甲。肾上腺素等单胺类神经递质异常有关心3。 本病属于中医“肝风”范畴，多认为病变部位在肝。我们根据d,JL“肝常有 余，脾常不足’’的特点，选择补脾和泻肝的代表方剂六君子汤合泻青丸n1治疗 dJL多发性抽动症，疗效肯定。为进一步明确泻肝法治疗抽动症的作用，揭示 其药效学机制，我们通过建立TS小鼠模型进行了如下研究。 1材料 1．1实验动物 ICR小鼠，雄性，健康，(18+2)g，清洁级，购自北京维通利华实验动 物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2007．0001。随机分成6组，每组 灯照明(8am～5pm)。 1．2主要实验试剂与仪器 (1)实验试剂 泰必利片(江苏恩华)，中药配方颗粒(江阴天江)，标准品DA、NE、 为国产分析纯， 1．辛烷磺酸钠(HPLC)，乙腈，超纯水，液氮 (2)实验仪器 动程序自动控制仪(中国医学科学院药物研究所制)，美国ESA5600A高效 液相色谱8通道库仑阵列电化学分析系统，SIGMA3K15台式低温高速冷冻离 心机，过滤膜(0．45¨m) 2方法 g_-十七届全国中医儿科学术研讨会暨世界中医药学会联合会第二届中医儿科学术交流论文汇编 2．1造模 ICR雄性小鼠90只，随机分成6组，分别为空白组，模型组，西药泰必 利组，健脾止动汤组(六君子与泻青丸合方)，六君子汤组，泻青丸组，每组 15只，分笼适应性喂养1周后开始造模，参照神经毒素全身用药法【41，除空白 组外，其余5组小鼠在灌胃给药后立即进行腹腔注射IDPN，为获得更明显的 TS模型鼠的特征性行为改变(运动行为和刻板行为【4J)，剂量由原文献报道 的150mg·kg一·d。1增至300mg·kg～·d～，空白组腹腔注射等体积的生理盐 水，每天1次，连续7天。 2．2灌胃给药 造模当天同时进行灌胃给药，以相当于儿童临床用药的5倍剂量， 20mL·k蛋1．d．1，空白组和模型组给予生理盐水，其余4组分别给予泰必利(按 含0．359生药)、泻青汤(1mL含0．459生药)，每天1次，连续4周。 2．3小鼠自主活动测定 参照张如意等【51报道的方法，采用ZIL．2小鼠自主活动程序自动控制仪， 分别于造模后第1天，第8天，第15天，第22天对各组小鼠自主活动进行测 定，安静、避光环境下，先将小鼠置于自主活动箱中适应3分钟，然后开始记 数小鼠在5分钟内的自主活动次数，每测定完1组小鼠，均清洁自主活动箱中 小鼠排泄物，以消除对下只鼠自主活动的影响。 2．4高效液相色谱电化学法检测小鼠血浆单胺类递质的含量 (1)色谱条件 美国ESA5600A高效液相色谱8通道库仑阵列电化学分析系统，色谱 HR．80(4．6mmx8 柱：ESA cm)。流动相：90mM磷酸二氢钠，50mM柠檬 酸，1．7mMl．辛烷磺酸钠，501aM 50、 过滤，超声脱气10分钟。柱温30℃，流速0．6mL／min，电势设置．1 200、350、500 mV，进样量20I_tL。 (2)血浆单胺类递质检测 灌胃4周，末次行为学测试后，摘眼球取小鼠全血0．5mL，放入预冷的 荡混匀，冰上静置10min，4。C，14000×g，离一tl,15min，取上清液，0．451am 滤膜过滤，进样待测。 (3)标准曲线 第四部分科学研究 6个小同浓度，依次测定后以对照品峰面 释成160、80、40、20、10、5