固定条件对cRNA探针原位杂交检测影响地研究（P131-133）.pdfVIP

固定条件对cRNA探针原位杂交检测影响的研究 倪灿荣 g_-军医大学长海医院病理科200433 Situ 上世纪60年代末，Gall 1969 …和John 1969 “o首刨原位杂交 In hybridization； ISH 检测方法。开创了组织学和细胞生物学研究的新纪元。免疫组化方法可以显示其已经 合成的蛋白质分子，有助于了解细胞类型的特征，而原位杂交能检测到组织细胞内蛋白质合 成过程中的精确定位。ISH的敏感性和杂交效率取决于如下几个方面：①探针的类型和杂交 条件；②检测方法的敏感性；③组织的保存和固定。前二点所涉及的内容已有许多的文献报 道。mRNA ISH的成功与否，组织的保存和固定也相当关键，尤其要重视固定的时间和固定 液的pH值。理想的圆定应该可以防止组织细胞内mRNA丢失．探针能顺利到达靶RNA， 并与之结合。IS／／一般均用多聚甲醛固定组织，以使蛋白质上氨基快速发生交联，从而达到 防止靶mRAN的丢失。在杂交过程中。高温和甲醛胺可以部分除去交联，可以促使探针渗 透，有利于杂交体的形成。但如果处理过度也可使靶RNA降解，因此，杂交温度和固定强 度 固定液的浓度、固定时间和固定液的pH值 比例对于获得理想杂交信非常重要。本文研 cRNA探针．5例 究固定条件对杂交结果的影响，利用二种凋亡抑制基因Survivin和Livin 外科手术切除乳腺癌