应用细菌分子间同源重组机制快速克隆腺病毒基因组地研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 应用细菌分子间同源重组机制快速克隆腺病毒基因组的研究 牛建强。2，夏成柱1·，扈荣良1，张守峰1，黄耕1 (I．解放军军需大学军事兽医研究所解放军基因工程重点实验室，吉林长春l 30002) 鲁木齐8 以腺病毒为载体进行疫苗和基因治疗的研究，是近年的研究热点。目前的焦点问题是新型载体的构建， 经典的方法是体外连接，费时、费力。利用大肠杆菌分子间同源重组机制克隆目的基因，是近几年发展起 其高效同源重组机制，进行腺病毒大片段目的基因克隆的研究。旨在建立一种快速克隆大片段腺病毒基因 组的方法。 1材料和方法 1．1材料：菌株、质粒、CAV一2毒种及主要试剂：大肠杆菌BJ5 TRANSGENE I CAV一2自然弱毒YCAl8株由本室分离并保存。 1．2方法 1．2．1 酶切腺病毒全基因组，取适量酶切反应液，琼脂糖凝胶电泳检查是否酶切彻底。苯酚／氯仿、氯仿各抽提 分装，一20℃保存备用。 1．2．2克隆载体(pT615)的构建 1．2．2．1