真空抽滤技术在法医学硅藻检验中的应用.pdfVIP

全崮箜蕴达鎏医堂查塞速金逾塞塞 真空抽滤技术在法医学硅藻检验中的应用 赵建，刘超，胡孙林，温锦锋，石 河，何树文． (广州市刑事科学技术研究所公安部法医病理学重点实验室，广东广州510030) 【摘要】在法医学实践中，硅藻检验被认为是解决溺死案件最可信、最科学的方法。已有很多硅藻检验的方法被 法医学工作者们建立和改进，其中较常用的有硝酸消解法、soluene。350组织溶解法及酶消解法。但是这些方法均存 在不少缺陷，本文基于作者课题组的研究，对真空抽滤技术在法医学硅藻检验中的应用进行介绍，旨在为硅藻检验的 进一步应用提供参考。 【关键词】法医病理学；溺死；硅藻检验 水中尸体是法医学尸体检验中常见的类型，目前，欧美、日本及我国学者仍主张在鉴别生前入水还 是死后抛尸入水时，特别是水中腐败尸体的检验，仍将硅藻检验列为最常用的方法¨。o。 传统的硅藻检验方法的过程包括组织消解、离心富集硅藻及光学显微镜下观察。组织消解的方法 织消解时间长、易受污染，部分硅藻被破坏或损失、组织残余量大等缺点，易造成假阴性。8J。本文基于 作者课题组的研究，对真空抽滤技术在法医学硅藻检验中的应用进行介绍，旨在为硅藻检验的进一步 应用提供参考。 1 微波消解／真空抽影扫描电镜联用法 微波消解法‘12。是消解各类生物组织的先进方法。孙维琦等¨叫曾报道用光纤压力自控微波消解仪 和压力可控密闭微波消解罐消解组织的方法。赵建等1采用MW3000微波消解仪进行组织消解，发现 此法具有消解时间短、消解后的硅藻结构完整、残骸碎片极少、组织残留少、检出率高的特点。 传统硅藻检验方法中以离心方式富集消解液中的硅藻。赵建等073的研究发现传统硅藻检验方法 硅藻回收率仅为2．6％4-1．7％，而采用微波消解／真空抽澎扫描电镜联用法，硅藻回收率则可达 滤膜可以最大限度防止硅藻损失，其硅藻回收率显著高于传统离心方法。 进入溺死尸体内部器官中的硅藻个体小，含量低，Pollanen等…对771例溺死尸体股骨骨髓内硅藻 的研究表明，多数情况下骨髓组织内硅藻小于301上m，数量小于10个，检测脏器组织内的硅藻，需使用 较高放大倍数¨11。相对于光学显微镜，扫描电镜景深大、分辨率高且自动扫描，可能是硅藻检测和种属 分类最有效的技术手段¨“。 Tone等¨引和Paehar等¨41相继报道了采用传统强酸消解与扫描电镜检测的硅藻检验方法，表明这 种方法速度快，可观察硅藻的细微结构，而且容易实现图像存储。胡孙林等¨纠的研究表明，对于相同脏 器组织，采用微波消解所需时间约为硝酸乙醇消解法的1／5，强酸消耗量大大减少，且在密闭环境下进 行消解，因而更安全、环保。为达到组织消解彻底，硅藻形态不被破坏的目的，微波消解必须选择合适 的体系和消解条件，硝酸一过氧化氢消解法被认为能减轻传统强酸消解对硅藻的破坏¨…，因此可以采用 硝酸-过氧化氢作为消解体系，并使用经实验选择的最佳消解条件。 与传统硝酸破机法相比较，微波消解／真空抽滤／扫描电镜联用法检验时间短、硅藻结构完整、组织 残留少、检出率更高等优势¨…。 12 法医病理学 2 勒福特王水消解／真空抽滤／光学显微镜联用法 勒福特王水，俗称逆王水，是由3份浓硝酸和1份浓盐酸混合而成，其pH值1，低于王水，氧化性 高于王水。在无机物分析中，勒福特王水消解法是标准方法之一Ⅲ。。在越酸的环境下过氧化氢的氧化 性越强，与勒福特王水混合使用构建强氧化性的体系，利于有机物的消解。刘超等¨副首次将勒福特王 水与过氧化氢结合用于法医学硅藻检验，通过与传统硝酸破机法相比，显示出勒福特王水消解法同样 具有消解时间短、硅藻结构完整、组织残留少等优点。以肾组织消解结果为例，勒福特王水完全29肾 镜下观察可见背景清晰，硅藻形态结构完整。勒福特王水消解采用真空抽滤，将滤膜透明化处理后在 光学显微镜下观察，尽管还存在硅藻细微结构不清晰，硅藻重叠的不足，但是其在法医学硅藻检验中取 得了较好的效果，初步显示出勒福特王水／真空抽滤／光学显微镜联用法有较好的应用价值。 3 展望 随着研究的不断深入，真空抽滤技术用于硅藻检验的方法将不断完善。勒福特王水消解法有望在 组织消解方面弥补微波消解设备昂贵的不足，同样达到高效、安全的要求。而勒福特王水消解、真空抽 滤装置及滤膜透明化、并与光学显微镜观察相结合，建立价格低廉、设备简