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ToIl样受体4／核因子一K B信号途径上调内皮细胞氧化低密 度脂蛋白受体kox一1及它们在介导单核内皮 细胞黏附中的作用和药物干预研究 博士研究生： 王虹艳 旨导教师： 曲鹏 教授 指导小组： 吕 申 教授 专业名称： 中西医结合临床 摘 要 目的：内皮细胞损伤、炎症机制在动脉粥样硬化的发生和发展中 起着极为重要作用。氧化修饰的脂蛋自和局部或远距离的感染是慢性 炎症反应的两个重要触发因素。业已证明氧化型低密度脂蛋白 OX—LDL 通过作用于内皮细胞氧化低密度脂蛋白受体．1 LOX．1 参与这一过程。近年研究表明介导先天免疫和炎症反应的受体Toll．样 like 受体4 Toll 4，TLR4 参与了动脉粥样硬化的发生发展。 receptor 与LOX．1在动脉粥样硬化斑块内皮细胞上均表达增高，ox．LDL可上 介导内皮细胞损伤及炎症过程有待研究。我们应用TLR4特异性激动 察TLR4／NF·KB信号途径对HUVECs LOX．1表达的调节及它们在介 导内皮细胞黏附功能中的作用，从而在受体水平探讨感染与ox．LDL 在动脉粥样硬化发生中相互作用的机理，探讨TLR4／NF．1cB信号通路 在动脉粥样硬化中的作用机制。应用阿托伐他汀和银杏叶提取物 GBE50干预TLR4／NF-K B信号途径，以探讨他汀类药物及银杏叶提取 物在防治动脉粥样硬化中的作用机制。 方法： ·1’ 用蛋白质印迹分析检钡,IJTLR4、LOX．1蛋白表达。流式细胞术检测表达 TLR4、LOX—l阳性细胞数量。采用直接计数方法观察单核细胞与内皮 介导内皮细胞黏附功能中的作用，黏附实验前，分别应用抗LOX。l、 30min。 acid 2．应用NF．1出特异性抑制剂fcaffeic phenethylester， CAPE 2099／m1 预处理HUVECs 激HUVECs 24h。采用免疫组化方法观察NF．KB p65核易位情况；采用 蛋白质印迹分析检测核蛋白NF—KB p65表达变化。上述方法检测CAPE 导单核内皮细胞黏附的影响。 物GBE50 80pg／m1 预处理HUVECs 影响。 结果： TLR4、LOX．1 1．LPS 10～1000ng／m1 呈剂量依赖性上调HUVECs 和黏附分子ICAM-I、E—selectin mRNA表达。蛋白质印迹分析显示呈剂 量依赖性上调HUVECs TLR4、LOX．1蛋白表达。流式细胞术分析显示 抗体均部分抑带IjLPS介导的单核与内皮细胞黏附率的增加。 24h，激活NF．r．B，NF-rd3 2。LPS 1000ng／m1 N激HUVECs p65核 易位，核蛋I圭tNF—KB E．selecfin 皮细胞黏附率的增加。 ‘2‘ mRNA 表达上调，抑制1LR4、LOX．1蛋白表达上调和单核内皮细胞黏附率的 增加。 结论： 1．TLR4／NF．K B信号激活介导LPs正反馈地调节其自身受体TLR4 的表达，TLR4上调可能加重LPS对HUVECs损伤效应。 2．TLR4／NF．K B信号激活上调HUVECs LOX．1表达，提示TLR4 皮细胞的损伤，这可能是TLR4参与动脉粥样硬化发生发展机制之一。 此外也从受体水平将感染与OX—LDL在动脉硬化发病中的相互作用联系 起来。 3．本研究证实LOX—l不仅是内皮细胞摄取ox-LDL的受体，而且 其本身是一种内皮细胞黏附分子。 4．TLR4／NF．K TLR4／NF．K B信号激活参与内皮细胞损伤和动脉粥样硬化炎症过 程，从而在动脉粥样硬化形成过程中起重要作用。 5．NF．K B在LPS介导的上述效应中起关键调节作用，干预 TLR4／NF．K B信号可能成为防治动脉粥样硬化的靶目标。 TLR4／NF．K B信号途径及其后的炎症反应，可能是他汀类药物及银杏 叶提取物抗炎抗动脉粥样硬化作用的机制之一。 关键词：脂多糖 LPS 人脐静脉内皮细胞 HUvEcs B NF．K 核转录因子．K B Toll．样受体4 TLR4 氧化低密度脂蛋白受体 LOX．1 细胞间黏附分子一1 ICAM-1 E．选择素 E．selectin 单核内皮细胞黏附 阿托伐他汀 Atorvastatin，ATVl 银杏叶提取物GBE50 。3‘ TLR4／NF-KB LOX--1 Signals Endothelial Upregulates andRolefor Adhesionto Expression themin Monocyte Endothelium andthe onthem Intervention Drugs PhD Hongyan Candidate：Wang Supervisor：Pr