PCR技术及其应用-.pptVIP

PCR技术及其应用 PCR的定义： PCR（polymerase chain reaction) ： 聚合酶链式反应，又称体外DNA扩增技术。 聚合酶链式反应于1983年由美国科学家 K.Mullis建立，荣获1993年度诺贝尔化学奖， 为生命科学领域的研究开创了崭新时代。 PCR技术原理 Target Amplification 实验仪器 实验结果 增效PCR（booster PCR） 当扩增少于1000拷贝的模板DNA时会遇到两个问题：一是形成引物二聚体，一是非特异扩增，消耗了引物和酶，而特异扩增片段产量降低。对于这种情况，可设置二步PCR，先用较低浓度的引物进行初级PCR，此时由于引物少，形成引物二聚体的可能减少，但它并不影响靶序列的扩增，只是由于引物少产量不高。约经15～20个循环后补充产物量，以初级PCR产物为模板进行扩增，靶序列的产量将相应增加。 在同一PCR体系中加入数对PCR引物，如果这些引物的退火温度相近，并且所覆盖的区域不重叠，这样的反应体系可同时扩增多个DNA片段。 多重PCR常用来检测同一基因的多个外显子的缺失。 原位PCR技术 原位PCR Hasse等于1990年建立。 是指在组织细胞里进行PCR反应，它结合