参麦注射液对大鼠神经元内质网应激诱导凋亡的影响_临床医学论文.docVIP

参麦注射液对大鼠神经元内质网应激诱导凋亡的影响_临床医学论文 参麦注射液对大鼠神经元内质网应激诱导凋亡的影响_临床医学论文 作者：李晓峰 张红 董艳玲 王铁建 李燕华 李吕力 【摘要】 目的 探讨参麦注射液对大鼠皮层神经元内质网应激诱导凋亡的保护作用。方法 体外培养SD乳鼠皮层神经元细胞，免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度，流式细胞术AnnexinＶ、PI双标检测凋亡率及活性caspase、表达，Western印迹免疫分析GRP78、细胞色素C蛋白、Bcl蛋白表达，Fura法荧光分光光度计检测细胞内钙浓度（〔Ca2+〕i）。结果 SD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养,2 μmol/L毒胡萝卜素作用神经元24、48 h细胞凋亡率分别是17.88%、21.38%，参麦治疗组分别是7.42%、8.16%，两组差异显著(0.05)。胡萝卜素诱导神经元糖调节蛋白GRP78表达上调，活化caspase、，使细胞色素C蛋白表达增加，Bcl表达减少。参麦注射液促进细胞Bcl表达，抑制细胞色素C释放，减少活性caspase、含量，降低〔Ca2+〕i浓度。结论 参麦注射液能抑制体外培养神经元内质网应激所致的凋亡可能与其降低〔Ca2+〕i浓度有关。 【关键词】 细胞凋亡；内质网应激；caspase；Bcl；参麦注射液 【Abstract】 Objective To observe the protect effects of Shenmai (SM) injection on endoplasmic reticulum stressssessed by immunoblotting. Intracellular free calcium concertration 〔Ca2+〕i was measured with fluorophotometry. Results Cortical neurons of neonate rats could be cultured in vitro, the percentage of apoptosis induced by thapsigargin after intervened for 24 and 48 h was 17.88% and 21.38% respectively. GRP78 and cytochrome C protein levels were elevated in cortical neurons in response to thapsigargin. The expression of caspase3 and 9 were activated and the protein level of Bcl2 was decreased. SM significantly decreased the percentage of neuronal apoptosis and increased the expression of Bcl2, reduced neuronal 〔Ca2+〕i and the expression of caspase endoplasmic reticulum stress in vitro, which might be related to decreasing intracellular free calcium concentration. 【Key words】 Apoptosis；Endoplasmic reticulum stress；Caspase；Bcl；Shenmai injection 　　凋亡是脑缺血后神经元死亡的一种重要形式。凋亡信号途径包括外源性、内源性/应激途径。缺血后神经元的凋亡发生是一个多环节调控过程，其中包括基因表达的改变、兴奋性氨基酸的释放、钙离子稳态失衡、热休克蛋白表达受阻、脂肪酸与自由基形成、蛋白酶激活等过程，但脑缺血后神经元凋亡发生的确切机制目前还不十分清楚。内质网可能是细胞内诱导凋亡的一个新场所，内质网在应激状态下，可迅速诱导凋亡。毒胡萝卜素(thapsigargin)为不可逆性内质网钙ATP酶抑制剂，可诱导内质网应激。本研究旨在探讨大鼠皮层神经元内质网应激诱导细胞凋亡机制以及参麦注射液的保护作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物与试剂 　　新生SD大鼠（出生24 h内）由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（鄂）2004。高糖DMEM、神经元基础培养液、B27、胎牛血清、马血清购自GibcoBRL公司；胰蛋白酶、L多聚赖氨酸购自Sigma公司；Annexin V购自Bender MedSystems公司；Fura购自晶美生物公司；活性caspase、caspa