发光金纳米粒子测定曲通X100及其临界胶束浓度_临床医学论文.docVIP

发光金纳米粒子测定曲通X及其临界胶束浓度_临床医学论文 发光金纳米粒子测定曲通X及其临界胶束浓度_临床医学论文 作者：刘玫瑰 曹春 曹明 朱昌青 【摘要】 参照文献方法合成了BSA保护的水溶性发光金纳米粒子, 并考察了此探针在非离子表面活性剂曲通X中的发光行为。根据观察到的发光增强效应, 建立了一种简单的测定曲通X的方法。考察了发光金纳米粒子的浓度、体系酸度、反应时间及共存物质对测定的影响。在最佳条件下, 发光强度与曲通X的浓度分别在0～150 μmol/L和150～600 μmol/L范围内分段成正比关系。两条工作曲线的交点所对应的浓度与曲通X的临界胶束浓度十分吻合, 为胶束形成过程提供了直接的指示。作为一种生物相容性探针, 发光金纳米粒子被用于生物学样品中曲通X的分析测定, 结果令人满意。 【关键词】 曲通X临界胶束浓度, 发光金纳米粒子 1 引 言 　　曲通X是一种重要的非离子表面活性剂, 广泛应用于生物化学领域[1,2]。如在免疫组织化学和免疫细胞化学中, TX可通过溶解细胞膜上的脂质成分, 使抗体进入细胞[3]。检测TX的浓度, 对理解它与一些物质的相互作用具有重要意义。Singh等[4]使用微分扫描热分析、荧光和圆二色谱法研究了TX与球蛋白的相互作用, 发现两者之间可通过直接的键合作用结合, 且两者结合的化学计量比随TX浓度不同而变化。魏晓芳等[5]研究了TX与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用, 发现二者会形成复合物, 由此导致BSA荧光猝灭。 在不同TX浓度下, 二者的结合常数和络合比均不同。TX在溶剂中缔合形成胶束时所需的最低浓度即临界胶束浓度(CMC), 是一个重要的物理参量。常用的测量方法有电导法、表面张力法、折射率法及光散射法等[6]。荧光方法具有操作简单, 分析速度快的特点, 也常用于表面活性剂及其CMC值的测定。 迄今所用的探针大多为有机荧光染料[7,8]。 　　与有机荧光染料相比, 发光金纳米粒子(Luminescent gold nanoparticles, GNPs)具有独特的发光性能和良好的生物相容性等优点。近年来, 利用各种方法[9～11]合成出的GNPs已用于溶液中Hg2+ [11]和Ni2+ [12]的测定, 以及细胞成像[10]分析。 　　本实验参照文献[13]的方法合成了牛血清白蛋白(BSA)修饰的GNPs。实验发现, 水中的溶解氧对GNPs的发光有明显的猝灭效应，而在体系中加入TX则能有效降低溶氧对GNPs猝灭。在最佳条件下, 发光强度与TX的浓度分别在0～150 μmol/L和150～600 μmol/L范围内分段成正比关系, 可据此建立灵敏的测定TX的发光方法。此外, 两条工作曲线的交点所对应的浓度与TX的CMC值十分吻合, 为测定其CMC值、判断胶束的形成提供了简单的方法。利用此生物相容性探针, 测定了实际生物学样品中TX的含量, 结果令人满意。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　F荧光分光光度计(日本Hitachi公司); U紫外可见分光光度计(日本Hitachi公司); JEOL高分辨电镜(HRTEM, 日本电子株式会社); 85型磁力搅拌器(江苏金坛正基仪器有限公司); TGL型高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA); 曲通X， 上海国药集团化学试剂有限公司; 所用试剂均为分析纯; 水为二次蒸馏水。 　　2.2 实验方法 　　2.2.1 GNPs的制备[13] 0.125 mL 1% HAuCl4·4H2O(m/V)稀释到20 mL,加入134 mg BSA , 剧烈搅拌2 h, 加入30.6 mg NaBH4继续反应24 h, 高速离心除去较大粒径的粒子后备用。HAuCl4·4H2O与BSA的摩尔比是3∶1。以L色氨酸的量子效率(QY)为基准(QY=0.14), GNPs的量子效率QY=0.052 , 与文献[13]一致。 　　2.2.2 样品处理 在一系列10 mL具塞试管中分别加入0.48 mL GNPs溶液、1 mL 0.1 mol/L Na2CO3缓冲溶液, 然后加入不同量的TX标准溶液或样品溶液, 稀释至6.0 mL并充分摇匀, 在室温下放置10 min后进行荧光测定。 　　荧光测量在室温(15 ℃)下进行, 采用光通路10 mm的石英比色皿, 激发波长为320 nm, 激发和发射狭缝宽度为10 nm; 光电倍增管的电压为-700 V。 　　实际样品由安徽师范大学生命科学学院提供。取校园植物(卷柏、雪松), 剪碎, 放研钵中加液氮磨碎。称取该新鲜植物细胞样品0.1 g, 用0.001 mol/L TX溶液在65 ℃水浴中振荡处理50 min, 离心后取不同量的上层清液按分析步骤进行