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嗅鞘细胞对活化的星形胶质细胞的作用_临床医学论文 嗅鞘细胞对活化的星形胶质细胞的作用_临床医学论文 作者：刘志元, 刘锦波, 张志坚, 龚爱华, 张俊 【摘要】 目的： 研究体外培养的大鼠嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cell,OEC)对活化的星形胶质细胞(astrocytes,AST)的作用。方法： 体外培养嗅鞘细胞和星形胶质细胞。星形胶质细胞经纯化传代,细胞融合后利用划伤法得到活化的星形胶质细胞,将嗅鞘细胞与活化的星形胶质细胞共培养24 h后,观察星形胶质细胞增殖能力的改变,以及其表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)的变化。结果： 活化的星形胶质细胞与嗅鞘细胞共培养后,MTT实验表明其增殖能力增强;免疫荧光染色、RT-PCR和蛋白质印迹法测定结果表明共培养后活化的星形胶质细胞表达的GFAP和CSPG降低。结论： 嗅鞘细胞作用于活化后的星形胶质细胞以后,能够促进星形胶质细胞的分裂增殖,同时能够减少星形胶质细胞胶质化,降低抑制性细胞因子的表达。 【关键词】 嗅鞘细胞; 星形胶质细胞; 增殖; 胶质纤维酸性蛋白(GFAP); 硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG) 　　[Abstract] Objective: To study the effect of olfactory ensheathing cells on reactive astrocytes in vitro.Methods： Olfactory ensheathing cells and astrocytes were cultured from Sprague Dawley Rats in vitro. Astrocytes were purified then passaged and grown to confluence.Some cultures were scratched to induce a reactive astrocyte phenotype.Olfactory ensheathing cells were added onto confluent astrocytes for 24 h.The differences of cell proliferation,expressions of glial fibillary acidic protein(GFAP) and chondroitin sulfate proteoglycans(CSPG) were measured among the normal group, active group,and the cocultured group. Results： When olfactory ensheathing cells were co CSPG expression was also observed. Conclusion： After co 　　[Key words] olfactory ensheathing cells; astrocytes; proliferation; GFAP; CSPG 　　脊髓损伤的治疗是临床的一大难题,缺乏有效的治疗方法,因此一直是科研人员和临床工作者关注的重点。嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cell,OEC)本身具有促进神经细胞和嗅神经再生的重要功能,而且能够分泌多种神经营养因子和促进神经再生修复的黏附分子[1]。脊髓损伤后嗅鞘细胞移植有利于轴突的再生,减少组织的丢失,促进运动功能的恢复[2-3]。 　　脊髓损伤后由星形胶质细胞(astrocytes,AST)等过度增生的胶质瘢痕是影响轴突再生和功能恢复的主要不利因素。嗅鞘细胞容易与星形胶质细胞混合生长,不会引起后者的肥大以及硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)表达的增加。不仅如此,嗅鞘细胞移植到损伤的脊髓背根后,传入纤维的轴突能够穿越损伤区域的胶质瘢痕到达脊髓,轴突与神经元再次建立功能联系[4]。Li等[5]认为嗅鞘细胞的修复作用尤其是促轴突再生,形成新的传导通路等方面与星形胶质细胞密切相关。 　　嗅鞘细胞是否作用于损伤早期活化的星形胶质细胞,从而减少其增生,减轻胶质瘢痕的形成还不是很清楚。本实验采用体外细胞共培养的方法,排除脊髓损伤后复杂的细胞环境等其他因素干扰,探讨嗅鞘细胞对活化的星形胶质细胞增殖能力、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CSPG表达的影响以及可能机制。 　　1 材料和方法 　　1.1 材 料 　　DMEMF12(1∶1)、FBS、0.25%胰蛋白酶+0.05%EDTA(Gibco公司,美国);PolyLlysine(Sigma公司,美国);兔抗NGFRp75、小鼠抗人 GFAP、FITC羊抗兔I