大豆异黄酮对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞内钙超载的影响_临床医学论文.docVIP

大豆异黄酮对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞内钙超载的影响_临床医学论文 大豆异黄酮对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞内钙超载的影响_临床医学论文 作者：马丽娟 张雨薇 张文杰 赵春燕 【摘要】 目的 观察大豆异黄酮(SI)对H2O2诱导的原代培养大鼠乳鼠心肌细胞内钙超载的拮抗作用。方法 采用Wistar大鼠乳鼠体外心肌细胞培养，将心肌细胞分为对照组、H2O2损伤模型组以及H2O2损伤加SI治疗组:SI 0.1、1.0、10 μg/ml剂量组，预先24 h给予SI后使用0.3 mmol/L H2O2损伤心肌细胞，以Fluo3/AM荧光指示剂负载，应用激光共聚焦显微镜技术，分别于加入H2O2后即刻与15 min，检测〔Ca2+〕i变化。结果 动态监测15 min可见对照组心肌细胞内平均荧光强度值较低;H2O2加入后即刻，细胞内荧光光密度值开始增加，15 min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著高于对照组(0.01);H2O2损伤加SI治疗组：预给SI 0.1、1.0、10 μg/ml三个剂量组〔Ca2+〕i静息荧光强度值、峰值和钙稳态期荧光强度值均较H2O2损伤模型组明显降低(0.01);同时可见与对照组比较，三个浓度的S.I.均可使心肌细胞内游离钙离子(〔Ca2+〕i)浓度的平均荧光强度值显著降低(0.01)。结论 SI能显著减轻H2O2诱导的培养心肌细胞内Ca2+超载，且随着药物浓度的逐渐升高，细胞内钙荧光强度反而逐渐下降，呈现剂量依赖性。 【关键词】 大豆异黄酮;培养心肌细胞;钙;过氧化氢 　　【Abstract】 Objective To examine the effects of hydrogen peroxide on intracellular free calcium concentration (〔Ca2+〕i) in cardiomyocytes and its antagonism by soybean isoflavone. Methods A cell culture model of Wistar neonatal rat cardiac myocytes was used. The myocardial cells were divided into control , H2O2 damage, H2O2 damage plus soybean isoflavone with different doses (0.1, 1, 10 μg/ml). Myocardial cells were damaged by 0.3 mmol/LH2O2. Confocal microscope was used with Fluo3/AM as calcium indicator to detect changes of 〔Ca2+〕i immediately and 15 min after H2O2 intervention, respectively. Results After application H2O2 0.3 mmol/L, the intracellular free calcium concentration was increased significantly(0.01). SI 0.1, 1, 10 μg/ml decreased the intracellular free calcium average concentration(0.01). Conclusions After application SI, the intracellular free calcium concentration with a dosedependence manner is decreased significantly. 　　【Key words】 Soybean isoflavone; Cultured cardiac myocytes; Calcium; H2O2 　　整体动物实验表明：大豆异黄酮(SI)对大鼠心肌缺血再灌注损伤、心律失常以及脑缺血损伤均具有保护作用〔1〕，但其作用机制尚未完全阐明。心肌缺血缺氧导致细胞膜、线粒体及溶酶体结构和功能受损〔2〕，其主要机制为缺氧引起的氧自由基增加、细胞内钙离子超载及线粒体能量合成障碍〔3〕。此三者单独作用或相互作用而导致细胞结构和功能代谢障碍。Ca2+作为细胞生命活动中信息传递的第二信使，是维持心肌细胞功能的基础因素，影响心肌收缩、电兴奋等生理功能的变化。氧化应激是心肌损伤的常见因素，可使心肌细胞内游离Ca2+浓度(〔Ca2+〕i)升高，出现钙超载。本实验探讨大豆异黄酮的心肌保护作用是否与减轻氧化损伤导致的细胞内钙超载有关。 　　1 材料与方法