人骨髓间充质干细胞体外成软骨诱导研究_临床医学论文.docVIP

人骨髓间充质干细胞体外成软骨诱导研究_临床医学论文 人骨髓间充质干细胞体外成软骨诱导研究_临床医学论文 【摘要】 目的： 研究人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）在体外培养过程中的增殖和成软骨分化现象和规律。方法： 以密度梯度离心法分离健康成人髂骨MSCs，观察体外培养过程中细胞形态、生长和增殖现象。取第三代细胞给予地塞米松，维生素C和不同剂量转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）行成软骨细胞诱导。3周后行阿利新蓝及甲苯胺蓝染色蛋白多糖，免疫荧光检测II型胶原，阿利新蓝比色法检测葡萄糖氨基聚糖。结果： 体外培养条件下MSCs生长旺盛。在TGF-β1作用下MSCs向软骨骨细胞分化，TGF-β1 10 μg/L组软骨细胞标志物表达最强。结论： MSCs有旺盛的增殖能力。MSCs在一定诱导条件下可以向软骨细胞分化，转化生长因子β1（TGF-β1）是诱导MSCs向软骨分化的关键性因素，10 μg/L是其最佳诱导剂量。 【关键词】 骨髓间充质干细胞; 成软骨; 转化生长因子β1 　　［Abstract］ Objective: To research the phenomenon and rule of multiplication and chondrogenesis of mesenchymal stem cells(MSCs) derived from human bone marrow in vitro. Methods： Healthy adult′s MSCs were isolated from Ilium and purified by density gradient. To observe the conformation, growth and multiplication of MSCs cultured in vitro. We chose the passage 3 MSCs and induced them into chondrogenic differentiation with Dexamethasone，Vitamin C and TGF-β1 in different dosage formed chondracytes induction.After 3 weeks, we measured the sulfate glycosaminoglycan with toluidine blue and alcian blue, type Ⅱ collagen with immunofluorescence and glycosaminoglycan with alcian blue colorimetry. Results： MSCs can be cultured well in vitro. MSCs were induced into chondrocytes by TGF-β1 and TGF-β1 10 μg/L group had the most evident expression. Conclusion： MSCs have strong ability of multiplication and could be induced into chondrocytes under certain circumstances. TGF-β1 is the major factor of chondrogenesis while 10 μg/L is the best inducing dosage. 　　［Key words］ mesenchymal stem cells; chondrogenesis; TGF-β1 　　各种由创伤和疾病引起的关节软骨缺损在临床上十分常见,目前临床上尚无有效的治疗方法。近年来组织工程技术的发展给修复关节软骨缺损带来了希望。最近的比较研究证实骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs)是修复全层软骨缺损的最佳细胞源［1］。笔者采集健康人骨髓，以密度梯度离心法分离人MSCs，行体外培养扩增及成软骨诱导，希望为临床治疗软骨缺损提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 对象 　　骨髓标本取自3名健康成年男性自愿者（28，34，37岁）髂后上棘。3人均无全身性疾病和代谢性疾病。取得知情同意后，无菌条件下抽取骨髓5 ml置于抗凝环境。 　　1.2 主要试剂 　　L-DMEM培养基（Gibco公司），类标准胎牛血清（民海生物公司），转化生长因子（TGF）-β1（美国Peprotech公司），维生素C、地塞米松、胰蛋白酶、硫酸软骨素