小牛肝提取物对新生小鼠肝细胞损伤的影响_临床医学论文.docVIP

小牛肝提取物对新生小鼠肝细胞损伤的影响_临床医学论文 小牛肝提取物对新生小鼠肝细胞损伤的影响_临床医学论文 【摘要】 目的 研究不同浓度的小牛肝提取物对新生小鼠肝细胞损伤的影响。方法 采用Ⅳ型胶原酶消化法制备游离肝细胞悬液，以低血清进行肝细胞原代培养，12～16 h后用0.1 mmol/L的H2O2诱导肝细胞损伤，同时加以不同浓度的肝提取物，观察(100～1 000)mg/L的小牛肝提取物对肝细胞损伤的影响。结果 小牛肝提取物在100 mg/L时即可起到保护肝细胞损伤的作用，但效果不明显，在500 mg/L时可明显保护肝细胞损伤，之后随着浓度的加大保护作用逐渐减弱。结论 小牛肝提取物对H2O2诱导的肝细胞损伤具有一定的保护作用，其中以浓度为500 mg/L时效果最明显。 【关键词】 小牛肝提取物 H2O2 肝细胞培养 肝细胞损伤 保护作用 　　Abstract：Objective To study the effect of different concentrations of calf liver extract on the damage of the neonatal mice hepatocytes. Methods Hepatocytes were digested by IV-Collagenase and cultured with low-serum medium, induced by H2O2 after 12～16 h. Various concentrations of calf liver extract were added to the primary cultured hepatocytes to observe the effect of (100～1 000) mg/L calf liver extract on the injured liver cell. Results Calf liver extract at 100 mg/L could protect the hepatocytes from injury, but the effect was not obvious. At 500 mg/L, calf liver extract could protect the hepatocytes obviously. With increasing concentration, the protective effect weakened gradually. Conclusions Calf liver extract could protect hepatocytes from damage induced by H2O2, the effect at a concentration of 500 mg/L was the most obvious. Key words：calf liver extract; H2O2; hepatocytes culture; hepatocytes injured; protective effect 小牛肝提取物以小牛肝为主要原料,经物理方法提取的小分子蛋白质，含有丰富的维生素B2、B12、叶酸、肝细胞刺激因子、嘌呤核苷和各种氨基酸，整体实验已证实对急性肝损伤具有保护作用［1］。为进一步研究肝提取物的保肝作用，本文采用Ⅳ型胶原酶消化法分离肝细胞进行体外培养，用H2O2体外诱导肝细胞氧化损伤模型，在细胞水平上证实小牛肝提取物对肝细胞损伤的保护作用，为生物药的研发和应用提供可靠依据。 1 材 料 　　1.1 实验动物 　　昆明株1～3 d新生小鼠，雌雄不限（辽宁医学院实验动物中心提供） 　　1.2 药品与试剂 　　小牛肝提取物；D-Hanks液；Ⅳ型胶原酶（美国Sigma公司）；RPMI-1640（北京赛驰生物科技有限公司）；青霉素100 μg/mL，链霉素100 μg/mL；H2O2、胎牛血清（锦州奥鸿药业有限责任公司）；细胞培养板；MTT试剂盒、ALT试剂盒、MDA试剂盒、SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所） 2 方 法 　　2.1 小牛肝提取物的制备 　　取1 kg小牛肝，按文献［2］的方法制备提取物。提取物呈微黄色粘稠状液体，味腥；照分光光度法测定，在285 nm 的波长处有最大吸收；pH值应为6.0～7.5；-20 ℃保存。 　　2.2 新生小鼠肝细胞的分离与培养 按文献［3］ ，将乳鼠于75%酒精中浸洗10 s后断头处死，迅速取出肝脏置于含有双抗的4 ℃的D-Hnaks液中漂洗去除血污，剥除被膜和血管等纤维成份，用剪刀将肝组织剪成1 mm3左右的小块，再倒入4 ℃D-Hanks液试管中，吸管吹打，待组织沉淀后吸出上