PCR-DGGE技术中不同DNA提取方法综述.pdfVIP

ofAnhui 责任编辑姜丽责任校对卢瑶 安徽农业科学，Journal A画．Sci．2011．39I1)：52．102 PCR-DGGE技术中不同DNA提取方法综述 高慧琴，刘凌 (河海大学水文水资源与水利T程科学国家重点实验室，江苏南京210098) 摘要DNA提取是PCR—DGGE技术中首要而关键的一个步骤，不同的方法提取的DNA产量和纯度等方面有差异，会对后续步骤产生 很大影响。综述了目前广泛使用的DNA提取方法，以期为研究者提供参考。 关键词DNA提取：微生物；PCR．DGGE 中图分类号S188文献标识码A 文章编号0517—661l(2011)ol-00052-01 ReviewofDifferentDNAExtractionMethodsinPCR—DGGE Technique GAO of and etal(StateLaboratory Resources Hui—qin Key Hydrology—Water HydraulicEngineering，Hohai 210098) variesin and AbstractDNAextractionisthe and in theDNAextracteddifferentmethods primarykeystepPCR-DGGE，and by yieldpurity， 80 to forre’ whichaffectsthe the DNAextractionmethodsalesummarizedas followingstepsgre．tly．Here providepreference widely—used searchers． wordsDNA Key extraction；Microbiology；PCR—DGGE 基于聚合酶链式反应的变性梯度凝胶电泳(Polymerase1机械法 chainreaction denaturinggradientgeleleetrophoresis，PCR-液氮冷冻研磨破碎细胞壤的方法通常用于植物总基因 D(ⅪE)技术是近年来广泛用于不同环境中微生物遗传多样组DNA的提取旧一“。超声波法是一种破碎细胞的物理方 法。万晶晶等渖j对活性污泥进行研究发现，超声波破碎法提 性分析的一种分子指纹分析技术。1993年，Muyzer等¨。首次 将该技术应用于微生物生态的研究，克服了传统培养技术由 取活性污泥DNA操作简单、价格低廉，而且克服了PCR扩增 于微生物难培养或不可培养带来的局限，并且具有可重复、 困难的问题。薛俊龙一-等发现，超声波法能较好地提取大肠 快速、简便等优点，因此在研究自然界微生物群落的遗传多 分散作用较差。不同的超声时间也对DNA产率、PCR扩增 样性和种群差异方面显示出明显的优越性¨1。PCR．DGGE 技术操作过程包含了一系列连续的环节，因此，每个环节不 效率和群落多样性分析有显著影响哺。。因此，对于不同的样 同方法的选择都会对最终DGGE图谱的分辨率产生影响，如品，需要根据具体的实际情况对超声条件进行优化。超声波 DNA(或RNA)的提取、PCR扩增、电泳时间、电泳温度、凝胶法常与其他方法结合使朋，如与复合螫合剂(脱氧胆酸钠+ PEG+Chelex 浓度、变性剂梯度和染色方法等。 100)等