地芽孢杆菌属DYth03 DNA聚合酶基因的克隆、表达及性质分析.pdfVIP

VoL 第30卷第1期 台 湾 海 峡 30．No．1 OF 2011年2月 JOURNALOCEANOGRAPHYINTAIWANSTRAIT Feb．，201l 地芽孢杆菌属DYth03 DNA聚合酶基因的 克隆、表达及性质分析 罗淑娅，李 侃，徐丽美 (国家海洋局第三海洋研究所、国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室，福建厦门361005) 摘要：从东太平洋热液区E53站位的深海沉积物样品中分离出l株能在65℃生长的嗜热茵 (DYth03)．该菌的16S 631 克隆得到DYth03的DNA聚合酶基因(DYth．p01)，序列分析表明该基因全长为2bp，G+C含 量为55．5％，推测编码为876个氨基酸，与Bst DNApolI的同源性最高(达98％)．将该聚合酶基因 克隆到prITQ—h表达栽体上，并在大肠杆菌DHl中进行表达．对纯化到的表达产物进行酶活性测 定，结果表明该酶具有聚合酶活性和5’．3’外切酶活性． 关键词：海洋生物学；嗜热茵；地芽孢杆菌属(Geobacillus)；16SrDNA；耐热DNA聚合酶；基因表达； 东太平洋 DOI：10．3969／J．ISSN．1000．8160．2011．01．003 中图分类号：Q7 文献标识码：A 深海热液区是一个高温、高压的环境．由于深海 更优良的酶制剂． 热液区极端微生物具有许多不同环境中微生物不具 本研究从东太平洋热液区深海沉积物样品中分 备的特性，使它们在工业生产中的潜在利用价值普 遍得到人们的关注¨J．同时由于热液区高温菌体内 的蛋白质在高温下有一定的稳定性，使得这类细菌 Z獬)的一个种．本研究成功地克隆了该菌聚合酶基 可能具有特殊的功能基因和特种酶，因而极具潜在 因全长，并在大肠杆菌中对其全长基因进行了表达， 的应用价值怛1．地芽孢杆菌(GeobaciUus)是2001年 同时对表达产物进行了一些酶性质的分析． 命名的一个新属，是一类嗜热的、好氧或者兼性厌氧 的芽孢杆菌，分布于油田、火山口、温泉、干草堆等高 1材料和方法 温环境中【3J．由于其具有嗜热、兼性厌氧，降解烃和 1．1 材料 E．coli 产生表面活性剂的特性，在微生物采油、环境治理等 XL-Blue、E．coliDHl菌株和带有6个 领域中具有一定的应用价值HJ．同时，由于这类细 His标签的pyrQ—h表达载体为本实验室保存．如 DNA聚合酶、T4 菌可能具有特殊的功能基因和特种酶，使其极具潜 DNA连接酶、限制性内切酶 在的应用价值，从而受到人们的重视． 热稳定的DNA聚合酶在分子生物学应用中的 和蛋白分子量标准均购自大连宝生物工程有限公 扩增、测序、标识中占有重要的位置．诸多研究表明， 嗜热微生物可以提供具有独特生物学活性的高热稳 纯化通用试剂盒购自鹭隆生物发展有限公司．Ni“． DNA聚合酶 定性DNA聚合酶∞】．因此我们对从东太平洋热液 NTA亲合层析柱购自Qiage