水牛性控精液微生物分析.pdfVIP

and 2010年第46卷第21期 繁薅生理·ReproductionPhysiology 水牛性控精液微生物分析 陆阳清，，黄卫红：，韩晓慧1，蒙 冰，，许惠艳t，杨小淦1，卢晟盛1，许典新2，卢克焕p (1．广西大学动物繁殖研究所，广西亚热带生物资源保护利用重，董实验室，广西南宁530004； 2．广西畜禽品种改良站，广西南宁530001) 摘要：研究针对目前分离水牛x和Y精子性别控制过程中，容易导致微生物快速繁殖进而污染性控精液的问 题，对水牛新鲜及冷冻性控精液中的微生物进行分析研究，以期改进水牛分离精子保存方法。结果表明：新鲜采集 619个／mL、293个／mL和18935个／mL， 的水牛精液、常规冷冻精波厦分离后的冷冻精液中，平均茵落密度分别为10 三者差异显著(PO．05)。新鲜精液检测到的菌落中，革兰氏阳性球菌占48％，阴性杆茵占41％，阳性杆茵占9％， 霉菌占2％；性控冷冻精液中的茵落100％为革兰氏阴性杆菌。对性控冻精菌落药敏检测发现，茵落对妥布霉素和 庆大霉素均呈现耐药性，而对丁胺卡那霉素以及药物环丙氟哌酸药物敏感性较强。本研究结果，为改进水牛分离 精子稀释液以及冷冻保存液中的抗生素使用提供了有价值的参考。 关键词：性控精液；微生物；水牛 中图分类号：$823．3 文献标识码：A 目前，分离精子经冷冻后，已经在许多动物上获 法采集广西畜禽品种改良站的纯种摩拉水牛(Mur- rah 得性控后代。研究表明，分离精子体外受精后的卵 Buffalo)精液。利用精子图象分析系统检测精子 母细胞分裂率和囊胚发育率往往低于常规精子，特 的畸形率、活率和浓度。用于本研究的精液样品畸 x 别在囊胚发育率方面差异显著㈣1；在分离精子人工 形率小于25％、活率大于60％，且浓度大于6 108／mL。 授精中，受胎率也比常规精子低20％一40％f41。分离 过程对精子的机械、物理、化学等损伤可能是影响分 1．2精子分离及冷冻新鲜采集的精液用TALP液 x 稀释至200106／mL，加入H033342浓度为40 离精子受精能力的主要因素，但精液中的细菌污染也 la,g／mL， min。染色结束后1：l加入含4％卵 可能是影响其受精成功率的因素。Andersson等|5研究35℃水浴染色60 发现，荷斯坦公牛精子分离后的冷冻精液中的微生 物污染严重，菌落密度超过10个／mL，而来自同一FDC#40。用50p．m孔径的滤筛将精子过滤到另外 头公牛的常规冷冻精液却没有检测出细菌污染。 一个试管，除去凝集成团的精子或碎片，染色处理完 目前，虽然分离水牛精子已经在人工授精和体 成的精液样本放置于2l℃水浴环境中直到分离。 外受精上都得到了成功应用并获得性控后代16,71，但 分离精子流式细胞仪设定紫外激发光功率 对分离水牛精子冷冻精液中的菌落分析研究仍然缺 150 乏。因此，本研究旨在对水牛精子分离微生物污染 率对定向正确的x精子和Y精子设门分离。用2支 进行分析检测，为改进水牛精子分离及保存方法、提 预装进2mL含20％卵黄的接收液50mL的试管收 高分离精子在体外受精和人工授精中的应用效率提 集分离精子。收集得到的精子移到5℃