生物素-亲合素系统-时间分辨荧光免疫分析法检测抗核抗体方法学的建立和临床应用.pdfVIP

-196- 生堡凰堡题堂盘圭垫12生3旦箜!鱼鲞筮3塑￡丛n』丛!些些丑：丛堂h垫!至：巡：!垂：№：3 ·短篇论著· 生物素．亲合素系统一时间分辨荧光免疫分析法检测 抗核抗体方法学的建立和临床应用 胡志刚 刘洁陈国千邹耀红俞蕾 【摘要】 目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中抗核抗体的生物素．亲合素系统．时 间分辨荧光免疫分析(BAS—TRFIA)方法。方法以hela细胞核和抗人免疫球蛋白(GAM)分别作为固相抗 原和生物素化抗体，Eu嘞示记亲合素；标准品或样品中抗核抗体与固相核抗原、生物素GAM、Eu砩示记亲合 素形成同相核抗原．抗核抗体．生物素化抗体．Eu叫瘃记亲合素的多层夹心免疫反应复合物；加入荧光增强 液解离Eu“，形成强荧光螫合物，荧光强度与样品中待测抗核抗体的含量呈正比．建立BAS-TRFIA方法检 测抗核抗体；对建立的BAS-TRFIA法检测抗抗核抗体的精密度、检测范围、稳定性等进行分析。收集50 名健康献血者、105例系统性红斑狼疮、109例类风湿关节炎、25例原发性胆汁性肝硬化、29例干燥综合 征、23例硬皮病、25例混合性结缔组织病患者血清标本，采用建立的BAS．TRFIA法检测这些患者血清中 的抗核抗体，计算阳性率。结果BAS-TRFIA法检测抗核抗体高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20) 精密度分别为3．13％、3．74％和5．76％，批间(n=8)精密度分别为5．3l％、6．25％和7．46％，均优于酶联免 疫吸附试验(ELISA)法；方法的灵敏度为2．24U／ml；平均回收率为100．74％；该方法测定值与进口ELISA 法所得结果高度相关(R2--O．989)；BAS-TRFIA法检测健康献血者、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、原发 性胆汁性肝硬化、干燥综合征、硬皮病、混合性结缔组织病患者血清标本抗核抗体，阳性率分别为0、 100％、23％、96％、38％、91％、92％；一强阳性标本，BAS-TRFIA法测抗核抗体的曲线良好线性范围在稀释 200 浓度1：12．5～1：409600的范围内；ELISA法测抗核抗体的曲线良好线性范围在稀释浓度1：100一l：51 d 的范围内，BAS-TRFIA法与ELISA法相比，抗核抗体可测量范围明显提高；试剂盒置于37℃水浴箱7 后，BAS-TRFIA法结合率仅下降15．9％，而ELISA法结合率下降58．4％，BAS-TRFlA法试剂盒稳定性较 好。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的BAS．TRFIA法检测人血清中的抗核抗体，对早期诊 断自身免疫病及监测疗效具有重要意义，有望在各检验科室得以普遍应用。 【关键词】抗体，抗核；生物素；荧光免疫测定 Establishmentand of forthe applicationbiotin．avidin．system．time-resolvedfluoroimmunoassayquanti． tlvedetectionofantinuclear Jie。CH OUYao- HU；舀ti-gang。LIU antibody-Ig E～Guo—qian。zH Clinical Medwal 如几g，yu厶￡Departmentof Laboratory，够f池d妒眦iPeople’sHospitaltO砒呵白lg University，五衄郫u214023，China aathor：LIU CorrespondingJ如，Email：jswxhzg@163．com 【Abstract】 Toestab