过亚硝酸根对DNA氧化损伤与其抑制作用研究.pdfVIP

第二届全国环境化学学术报告会论文集 过亚硝酸根对DNA氧化损伤及其抑制作用研究 李芸罗云敬’王云海钟儒刚 北京工业大学生命科学与生物工程学院，北京，100022 ， 摘要：＼过亚硝酸根具有强细胞毒性，能够修饰DN^碱基、遣成DN^单链断裂．本实验模拟生理条件(pH=7．4)， 实验发现在。w00一浓度一定的范围内，s—oHac的生成量与其浓度有依赖关系)在生理条件下，：氧化碳及 槲皮素对其氧化损伤有明显的抑制作用． 8一羟基譬氧乌苷‘8_0“06’ 关键字：过亚’：酸根脱氧气尹‘66) 二蕈：：化碳槲参素 0 引言 在大气中，通过光化学反应过程可以产生过亚硝酸“1。在生物体内，神经细胞、巨噬细 胞、内皮细胞等产生N0‘与Oz’后，也能够自动地生成oN00一。过亚硝酸根／过亚硝酸是强氧化 剂，具有细胞毒性。它不仅能硝化蛋白质、氧化脂质体，而且也可造成DNA损伤(DNA碱基 修饰、DNA单链断裂)。在急性炎症、动脉硬化、神经坏死症等病理环境中观察到由过亚硝 酸根引发的DNA损伤。 本实验以DNA的碱基片断dG为研究对象，通过测定其氧化标记物80HdG来研究过亚硝酸 根与dG反应能力，确定反应条件，并探讨二氧化碳、槲皮素对这种氧化损伤的抑制作用。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 主要仪器：U-3010紫外分光光度计(日本日立)、高效液相色谱一电化学检测器(荷兰 ANTEC Leyden) 主要试剂：dG、8-OHdG、槲皮素、甲醇(色谱纯)购自Sigma公司；亚硝酸异戊酯、 Tris碱、过氧化 氢、氢氧化钠购自北京化学试剂公司：其它试剂均为国产分析纯：水为二次蒸馏水。 1．2过亚硝酸根的制备 lliam 过亚硝酸盐溶液按Rao A．Pryor的方法制备“1。制备方法简述如下： M．Uppu与Wi 等物质量的过氧化氢与亚硝酸异戊酯，在冰水浴中反应6小时。反应后，加入粉末状二氧 化锰除去未反应的H20z。将过亚硝酸盐溶液(黄色)-20=c冷冻保存。采用用紫外分光光度计 测定过亚硝酸根的浓度(e=1670M。1cm。1)。 +北京市科技靳曩资助项目：项目壤号2003805．Emaihedu．cn，电话：010 luo蝴@bjut 泌争68 第二届全国环境化学学术报告会论文集 1 3过亚硝酸根对dG的氧化损伤 uM，过亚 将过亚硝酸根溶液与dG水溶液分别加入到Tris溶液中，使dG浓度为500 mM mM mM 硝酸根的浓度分别为0mML、0．5mML～、1L～、1．75L一、2 L。。，溶液pH为7．4， 谱条件： (1)流动相缓冲溶液：甲醇：水=2：3：15，其中缓冲溶液中含125mM柠檬酸 EDTA 一水化合物、250mM醋酸钠、lOOmM醋酸、250PM 11 (2)色谱柱：C．。反相色谱柱，4．6ram×250mm，5m(德国KNAUER)。 1．4co：、槲皮素对过亚硝酸根氧化损伤dG的影响 uMdG、1．75 在含有500 mML。1过亚硝酸根溶液的Tris溶液中，分别加入不同浓度 用HPLC—EC测定dG的氧化产物8-OHdG。 2 结果与讨论 2．1不同浓度的过亚硝酸根溶液对dG的氧化损伤 化损伤程度的标记物。不同浓度的过亚硝酸根对dG氧化损伤的结果如图1所示。从图1 mM 可以明显地看出，随着过亚硝酸根浓度从0 L。1增