SARS+CoV感染Vero+E6的电镜探究.pdfVIP

电子显微学报JChinElectrMicrosc．Soc 2004年 298 23(4)：298～298 SARS CoV感染VeroE6的电镜研究 黄小俊，张勤奋，崔金明，张景强+ (中山大学生物防治国家重点实验室结构生物学研究室，广东广州510275) 我们用广州地区临床确诊的SARS病人的咽拭其上的核糖体数量减少。还有些内质网扩张区域的 子标本感染VetoE6细胞，将感染3天即严重病变的 内含物浓缩成云雾状团块，并与内质网的边缘分离。 Vero 高尔基复合体部分扁平囊发生扩张，有的高尔基复 E6细胞进行3％戊二醛和1％锇酸双固定，经 CoV。细胞核的 乙醇脱水后用Spurt包埋剂包埋。样品进行超薄切合体扁平囊的末端可观察到SARS 片和用醋酸氧铀和柠檬酸铅双染色后即可用透射电 异染色质于细胞核边缘聚集成团，部分双层核膜扩 子显微镜进行观察。正常的VetoE6细胞也同上操 张，其内可观察到SARSCoV。另外，在少数病变的 作，作为对照。感染SARSCoV的VeroE6细胞内外 VeroE6细胞质中还可观察到环孔板，环孔板边缘的 均充斥大量SARSCoV。SARSCoV呈球状或椭球 小囊泡碎裂并与扩张了叉包裹SARSCoV的内质网 状，直径在60～100nto之间，细胞外及光滑泡内的融合。除此以外，在病变的VeroE6细胞中观察到 SARS CoV在核衣壳外可观察到明显的囊膜，而细胞 少量的位于细胞质和空泡内的髓鞘样图像。 CoV的形态和 内其它部位的SARSCoV仅观察到着色或深或浅的 由上述实验结果可以看出SARS 核衣壳。多数SARSCoV在细胞内以病毒包的形式 引起细胞的病变情况都与文献中描述的冠状病毒科 存在，病毒包包裹的SARSCoV多少不一，少则几 的其它病毒基本一致。冠状病毒在细胞质中复制、 颗，多则数十颗，上百颗，甚至有的SARSCoV呈紧 组装是以M蛋白作为核心组织已合成在内质网膜 密的有序排列。感染了SARSCoV的绝大多数Vero上的病毒蛋白(如s蛋白等)，引导病毒核酸与N蛋 E6细胞发生了不同程度的病变。最普遍的细胞病 白的复合物在内质网和高尔基复合体之间以出芽的 变为细胞空泡化，有些空泡内还观察到SARSCoV， 方式组装并进入泡中。这些变化都深刻反应着病毒 这些空泡的来源比较复杂，其中可能来自于高尔基 入侵给细胞带来的影响。一个值得注意的现象是在 复合体膨胀的扁平囊。线粒体发生明显嵴内肿胀， 病变的VeroE6细胞的细胞质和空泡中均观察到髓 嵴呈杵状甚至泡状膨大，而基质变密，电子密度增 鞘样图像。虽然现在仍无法很好地解释它出现的原 大，病变严重的线粒体嵴内肿胀到基质呈电子致密 因，但有研究表明它与SARSCoV入侵VeroE6细胞 板状绕于线粒体周边。粗面内质网发生扩张，扩张 有密切关系，其具体功能仍需进一步研究。 而成的区域中空或含有低电子密度的物质，附着于 参考文献略． 图1病变VeroE6细胞内外的病毒粒子形态，f：细胞外囊膜纤突明显的sARsCoV，◆一：细胞骨没有观察到囊膜的SAILS CoV，且病变YeroE6细胞发生空泡化(*指示处)(Bar=lOOran)；圉2病变严重的VetoE6细胞核内异染色质聚集成团，双 或含有低电子密度的物质(t)，有些其内还含有病毒粒子(◆_．)，另外线粒体发生明显嵴内肿胀(●_)，嵴呈杵状甚至泡状 膨大，而基质变密．电子密度增大(Bar=100hm)。 *通讯作者