ω-羟基烷酸甲酯的脂肪酶催化合成环十五内酯地研究.pdfVIP

∞一羟基烷酸甲酯的脂肪酶 催化合成环十五内酯的研究 沈芳刘雄民梁静娟李飘英梁文波 (广西大学化学化工学院，广西南宁530004) 捕要：采用己筛选到的假丝酵母菌株GXU08所产脂肪酶来催化底物15一羟基十五烷酸甲 酯关环合成环十五内酯，考察了脂肪酶活力、反应时间、温度、pH值、有机溶剂极性等对合成 转化率的影响。结果表明，在捏合羟基脂肪酸甲酯中，GXL,98具有提好的专一性，未发现环丸 内酯，环十三内醑及分子问聚合的=聚体等产物。底物于柏℃、180rpm．prI=6．0，脂肪酶活力 12．45U的条件下在环己烷中反应72h，转化率为17％。 关键词：脂肪酶环十五内酯15一羟基十五烷酸甲酯 1 前言 广西特产蒜头果油含有50％左右的二十四碳一15一烯酸LlJ，它是合成环十五内酯的原 料。有关“～羟基烷酸甲酯合成环十五内酯方法有多种-2j，如郭茂道L31等人已完成了化学法 合成，但其能耗大，反应条件苛刻。酶作为生物催化裁，具有很高的催化功能、底物特异性 和反应特异性【4j。20世纪80年代中期，K】jb日n∞等人将酶引入到非水介质中催化反应，开 辟了非水酶学这一崭新的研究领域。利用脂肪酶催化m一羟基烷酸甲酯合成大环内酯已取得 ～定进展【5刊，但底物转化率不够高，且专一性不理想，容易发生分子间聚合。 将筛选的GXU08所产脂肪酶在有机溶剂中催化m一羟基烷酸甲酯合成大环内酯进行研 究，考察脂肪酶活力、反应时间、温度、pH值、有机溶剂介电常数等参数对转化率的影响， 探讨酶对底物的专一性，为今后理论研究和应用开发提供基础。 2实验 2．1仪器 旋转蒸发仪、冷冻恒温摇床、13本岛津气相色谱一质谱联用仪(Gc—MS／QPS050A)。 2．2试剂 Chemical 环十五内酯标样(含量 98％，日本Askriehcompany产品)、环已烷(AR)、橄榄 油(cP)、1．5一羟基十五烷酸甲酯(自制)、脂肪酶酶粉(自制)。 2．3方法 2．3．1脂肪酶活力测定方法：用橄榄油乳化液法测定。一个酶活单位是在pH7．0，柏℃条件 下，每分钟释放lmmol游离脂肪酸的酶量。 2．3．2环十五内酯合成方法：准确称取0．5retool 15一羟基十五烷酸甲酯，加入lg脂肪酶粗 作者简介：沈芳(1978)，女。硬士研究生，研究方向：香料化学。 刘雄!是0960)，男，博士，广西大学教授，博士生导师，研究方向：香料化学。 ·936· 酶粉和50ml环已烷，在40℃下振摇反应72h。 2．3．3环十五内酯测定方法：反应结束后过滤除去粗酶粉，减压蒸发浓缩除去溶荆，再进 行GC—MS检洲，以质谱法做定性分析，以气相色谱法来进行定量分析。 气相色谱条件：色谱柱型号为DB一1(Jw (3。C／min)；然后继续升温至270℃(5。C／min)。柱前压为50kPa，分流比为1：59。 质谱条件：电离方式为EI，接口温度为230℃，电子倍增器1．5kV，电子能量70eV，扫 描速度0．5s／dec，扫描质量范围20‰一700％1。 3结果与讨论 3．1脂肪酶活力对转化率的影响 将一定量的15一羟基十五烷酸甲酯溶解在环己烷中，加入不同量的簿粉于40℃、180rpm 下反应72h，测定生成环十五内酯的转化率。酶活对转化率影响的实验结果如图1所示。 由图1可见，该脂肪酶对同种底物的催化能力随酶活的增加而增大，但当酶活增加到 1245U时，转化率达到最大，继续增加酶活合成转化率不再增加。 3．2反应时间对转化率的影响 为了考察反应时间对转化率的影响，在保持40℃、180rpm、pH=6．0的条件下，分别 反应24h、48h、72h及84h，测定合成转化率，实验结果如图2所示。 O 500 1000150020帅2500 0 翡’ ∞ 75 100 ” ofIi∞§胡J 时向，h activity Theeffectof