牦牛生长激素全基因的克隆测序与遗传多态性研究.pdfVIP

228_I生罾动擅遣僮直弛班宝迸屋 牦牛生长激素全基因的克隆测序和遗传多态性研究。 欧江涛1 钟金城滞陈智华2赵益新2 (1．海南农业科学院畜牧兽医研究所，海口，571100；2．西南民族大学，成都，610041) 摘要根据普通牛和其他哺乳动物基因的碱基序列和相关文献资料设计3对引物，用PCR扩增 并克隆测定了牦牛的GH基因，大小为2 方法构建分子系统树的结果均表明，牦牛与普通牛的亲缘关系最近，首先聚为一类；两物种合并后再与 水牛聚为一类；然后再同山羊和绵羊聚为一大类；最后才与红鹿聚为一类。采用PCR-RFLP方法研究了 0．9334和0．0666，未发现从型。 关键词牦牛；生长激素基因；克隆测序；多态性；分子系统树 生长激素(growthhormone，GH)是一种由垂体前叶嗜酸性细胞合成和分泌的调节脊椎动物生长发 育的熏要单链多肽类激素，由186—191个氨基酸组成，有两个二硫键，形成稳定的分子结构，分子量为 21000—22 lactogen，PL)同属于一个基因家 000Da，其与催乳索(prolaetin，PRL)和胎盘催乳素(placental 族，广泛存在于各种脊椎动物中。GH基因由5—6个外显子和4—5个内含子组成，cDNA一般长约 800～1 200bp；不同纲动物间核酸序列的组成、外显子和内含子的数目及大小、启动子、5’端和3’端侧翼 区存在很高的保守性；哺乳动物内含子与外显子的交界处一般都符合GT-AG规则；转录起始点上游 34bp以内有TATA盒，启动子含有顺式调控序列，以便对激素类信号作出反应。对各种动物GH基因的 相关研究表明”“。，GH能促进动物生长发育、增加产奶产肉量、提高饲料转化效率等。因此，可被作为 用来寻找与生产性能相关性状的候选基因。目前，功能基因克隆测序、定位、基因多态性与生产性能的 相关性和分子系统进化的研究已成为动物遗传育种的热点之～，但对牦牛的研究相对较少。本研究对 护和开发利用牦牛这一宝贵的遗传资源，发展高寒少数民族地区的畜牧业经济提供理论依据。 1材料与方法 1．1实验动物 在四川省红原县龙日种畜场随机选取30头健康成年的麦洼牦牛，颈静脉采血，置于冰瓶内带回实 验窒，一20℃保存备用。 1．2工具酶和试荆 ExTaq聚合酶、pMDl8一T II、AluI、Pst Vector、IPTG、X—Gal、MspI／Hpa I和HinfI等购自大连宝生 物工程有限公司，产物直接纯化试剂盒、小量胶回收试剂盒和小量质粒提取纯化试剂盒购自上海华舜生 ●基金项目：国家民委重点科研项目资助 作者简介：歇江涛(1975)，男，贵州织金人，硬士，主要研究方向：动物分子遗传 _通讯作者 屋刍盟撞登壬遗僮撞塞塑左洼|-229 物工程公司。 I．3 DNA的提取和检测 牦牛基因组DNA按参考文献…的方法提取，溶于TE中，一20℃保存。用琼脂糖凝胶电泳和紫外 分光光度法双重检测DNA的纯度和浓度，然后稀释成25ng／ixl浓度备用。 1．4引物设计 根据文献资料、普通牛GH基因的核酸序列”1和引物设计软件综合分析设计3对引物，使扩增的片 段间都有重叠，克隆测序后序列可保证能够完全拼接得到牦牛GH基因全序列。 引物 扩增范围 (根据普通牛已知序列来确定) TTCTCCAGGGGAT1TATC 从22bp到1225bp包括该基因的5’端侧翼区、 引物1：5’primer：CTC TC AACTCCTCAGTrTCC 3’primer：CTG 外显子1、外显子2、内含子1和2的一部分。 CACACCCCCTCCACACAGT 从1 引物2：5’primer：ATC 7兀’rCCACCCT