HPLC法测定心脑联通分散片中野黄芩苷的含量.docVIP

HPLC法测定心脑联通分散片中野黄芩苷的含量 严亚锋1，马文龙2 （1.陕西中医学院2009级研究生，陕西，咸阳 712046；2.杨凌示范区医院，陕西，杨凌 712100） 摘要： 目的 建立用HPLC法测定心脑联通分散片中野黄芩苷的含量。方法 采用HPLC法，Kromasil C18色谱柱（5μm，4.6×250mm ）；柱温: 40℃；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（40:60）；检测波长335nm。以野黄芩苷为对照品，外标法定量。结果 野黄芩苷在21.60～108.00ug/ml范围内线性关系良好（）98.25%，RSD1.04%。结论 本法操作简便、准确，重现性好，可用于该制剂的质量控制。 关键词：心脑联通分散片；野黄芩苷；HPLC；含量测定 心脑联通分散片是由SFDA《国家中成药标准汇编》心系分册“心脑联通胶囊”[WS-10031(ZD-0031)-2002]改变剂型而来，处方由灯盏细辛、虎杖、野山楂等七味中药组成，具有活血化瘀，通络止痛的功效。用于瘀血闭阻引起的胸痹，眩晕，症见胸闷，胸痛，心悸，头晕，头痛耳鸣等，以及冠心病心绞痛，脑动脉硬化及高脂血症见上述证候者[1]。本试验采用HPLC法对方中灯盏细辛所含野黄芩苷进行含量测定[2-4]，该法分离度良好、定量准确、重现性好，可作为心脑联通分散片的质量控制指标之一。 仪器与试药 1.1 仪器：LC-10ATvp液相色谱仪（日本岛津）；SPD-10Avp紫外检测器（日本岛津）；CS-Light中文色谱软件。 1.2 试药：野黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为110842-200605）；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；心脑联通分散片自制(批号：100201、100202、100203)；其他试剂均为分析纯。 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱（5μm，4.6×250mm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（40:60）；检测波长：335nm；流速:1.0ml/min；柱温: 40℃；理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于4500。 2.2 供试品溶液的制备 取本品10片，研细，取0.5g，精密称定，加三氯甲烷适量，置索氏提取器中提取2小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥尽三氯甲烷，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称重，水浴加热回流1小时，放冷，再称重，用甲醇补足缺失的重量，蒸干甲醇，残渣加水30ml，用乙酸乙酯洗涤3次，每次20ml，弃去乙酸乙酯层，水层用稀盐酸调PH至1，再用乙酸乙酯提取5次，每次15ml，合并乙酸乙酯层，蒸干，加甲醇定容至10ml 容量瓶中，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。 2.3 对照品溶液的配制 取经五氧化二磷干燥12小时的野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇使溶解，制成每1ml含60μg的溶液，摇匀，即得。 2.4 标准曲线和线性范围考察 精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的野黄芩苷 2.16 mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液待用。 精密吸取上述储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分别置于5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下测得峰面积。以峰面积为纵坐标，野黄芩苷浓度为横坐标绘制标准曲线，得线性方程为：Y=0.3899X +0.1945，r=0.9999。结果表明：野黄芩苷在21.60～108.00μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.5 干扰试验 照处方比例制备不含灯盏细辛的空白样品，按供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。精密吸取阴性对照溶液、对照品溶液及供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定，结果阴性对照在野黄芩苷峰部位无干扰。见图1。 A B C 图1 心脑联通分散片HPLC图 A．对照品 B．样品 C．阴性 2.6 精密度考察 精密吸取同一份供试品溶液10μl，重复进样6次，测定峰面积积分值，含量的RSD=0.%（n=6）。结果表明，本法精密度良好。 2.7 稳定性考察 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12h精密吸取10μl，按上述色谱条件测定峰面积积分值，含量的RSD=%（n=5），表明在12h内具有良好稳定性。 2.8 重复性考察 取同一批号6份，按2.2项下方法制备供试品溶液，测定峰面积积分值，其含量的RSD=1.%（n=6）。 2.9 加样回收率 精密称6份，分别精密加入对照品溶液（0.mg/ml）2、2、3、3、44ml，按2.2项下方法制