桃蚜抗性基因扩增地研究.pdfVIP

312 昆虫学创新与发展 桃蚜抗性基因扩增的研究 张建亮 乔传令. (中国科学院动物研究所农业虫鼠害综合治理研究国家重点实验室 北京100080) 摘 要 本文论述了桃蚜的抗性机制:酷酶基因的扩增，以及这些扩增1m酶基因的遗传 方式，重点回顾了桃蚜抗性基因诊断的新进展。这些结论对更深人地理解基因扩增的起源、 产生以及桃蚜抗性的发展是大有裨益的。同时，能够帮助我们更快速、容易、准确地进行 抗性测定。 关键词 桃蚜 基因扩增 抗药性 1 弓1言 桃蚜 (场zasPersicae)又名烟蚜，是一种危害甚烈的农业害虫。该虫不仅直接危害 寄主植物，而且还可传播 115种植物病毒 (占整个蚜虫传播的170种植物病毒的 67.7%)，其损失往往更为严重。桃蚜对许多农药已产生抗性。许多情况下，抗性的产 生是由于昆虫对杀虫剂的代谢能力提高。代谢杀虫剂的解毒酶一般使有毒的外来物经氧 化、还原或水解后，其产物的水溶性增高，它们更容易从昆虫体内排出。解毒酶包括细 胞色素P450氧化酶系、水解酶 (醋酶)以及谷肌甘肤S一转移酶等。本文重点论述桃 蚜的抗性。 2 与桃蚜抗性相关的E4和FE4醋酶 Devonshi。自1975年发现英国桃蚜对有机磷的抗性与醋酶活性增高有关后 (Devon- shire,1979)，对该醋酶进行了深人的研究，发现该酶存在于匀浆液的可溶性部分。经 电泳分离证明，其抗性仅与一条活性特别高的酷酶带E4有关，故称E4酷酶。 在桃蚜中，抗性是由于水解杀虫剂的醋酶E4或FE4过量合成而引起的 (吻- penoorth.FJ,1985)。从抗性 (R)和敏感 (S)品系纯化后的E4醋酶具有类同的动力学 特征，即具相同的活化中心。这表明R和S品系的E4醋酶无质的变化，而仅是量的变 化。其中高抗性的F4酶量高达10-l2pmoV蚜，约占可溶性总蛋白的3%一4%。后来， 从意大利Fe二 采集的R桃蚜中发现存在一个E4的突变型，称为FE4，二者可用电泳 来区别。FE4水解。一乙酸禁醋比E4更迅速，电泳迁移率也稍有不同，二者在分子量上 略有差异，E4和FE4分别为65000kDa和66000kDa(Devonshire,A.L.和Field,L.M， 1991)oFE4的其余性质完全类同于E4oE4是一种典型的梭酸酷酶，它的解毒作用有两 个:一是水解，二是对杀虫剂具较高的亲和力，从而减少了到达靶标的量，即起分隔作 用 (Sequestering)E4对氨基甲酸主要是分隔作用，水解作用是次要的;对有机磷，水 解作用是主要的，分隔作用是次要的。 。通讯作者 药 剂 毒 理 313 3杭性机理一酉旨酶基因的扩增 1979年，Devonshi。等研究了7个桃蚜无性系中醋酶E4量与抗性的关系后发现，随 着抗性的渐增，各品系间的E4量依次按几何级数增加 (级比为1.91)。据此提出了基 因扩增是抗性机理的假说 (DevonshireAL.FieldLM,1991)。现已证明，R蚜虫中的E4 mRNA高于S蚜虫，并对不同抗性水平 (即不同E4量)个体中的mRNA进行分级构造 cDNA文库，现己在120(〕个重组的文库中鉴定出3个阳性以克隆，用杂交扣留翻译 (hydrid一。stedtranslation)证实其中两个含E4序列，它们的序列为1KB。并以此为探 针，在一系列抗性变异体中探查的结果表明，抗性蚜虫中的E4序列增加。抗性最高的 蚜虫中增加的E4序列刚好是敏感的64倍，从而直接证实了E4基因扩增是桃蚜抗性的 主要机理 (Field,L.M.等，1993)0 FieldLM已经找出证据来说明引起抗性的FA和FE4基因是一个基因家族的 (Field, L.M.等，1998)。另外，FieldLM等已将醋酶基因成功地克隆并进行分析，发现E4 cDNA含有一个1656个核普酸的开放阅读框，它负责翻译552个氨基酸的蛋白质。FE4 cDNA与E4cDNA序列有99%是相同的，最重要的区别是，FE4的”RNA在3’端有36 个额外的核昔酸，所以FE4cDNA上有一个独立的核昔酸取代物。而且，BlackmanRL等 把E4和FE4的扩增基因在染色体上的位置已搞清。研究发现大部分品系均有单一的扩 增位点，在常染