实验四酶的特性实验.docVIP

说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个） 写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！ 实验四 酶的特性实验 一、实验目的 酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。 二、实验内容 本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。 （一）酶的专一性 1、实验原理 本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。 2、材料、仪器与试剂 (1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 (2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架； (3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；班氏试剂。 3、实验操作 （1）稀释唾液的制备 ①唾液的获取 用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。 ②不同稀释度唾液的制备（用大试管） 本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。 举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。 1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。 （2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验） 表1 唾液淀粉酶稀释度的确定 管号 1（1：1） 2（1：5） 3（1：20） 4（1：50） 5（1：200） 0.5%淀粉溶液（滴） 4 4 4 4 4 稀释唾液（ml） 1 1 1 1 1 37℃恒温水浴中保温5分钟 班氏试剂（ml） 1 1 1 1 1 沸水浴2～3分钟 实验结果 （2）淀粉酶的专一性 表2 淀粉酶专一性实验 管号 1 2 3 4 5 6 0.5%淀粉溶液（滴） 4 － 4 － 4 － 2%蔗糖溶液（滴） － 4 － 4 － 4 最佳稀释度唾液（ml） － － 1 1 ―― 煮沸过的最佳稀释度唾液（ml） － － － － 1 1 蒸馏水（ml） 1 1 － － － － 37℃恒温水浴中保温5分钟 班氏试剂（ml） 1 1 1 1 1 1 沸水浴2～3分钟 实验结果 （二）温度对酶活力的影响 1、实验原理 酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。 2、材料、仪器与试剂 （1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 （2）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴； （3）试剂：溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；KI－I2碘溶液； 3、实验操作 取4支干燥的试管，编号后按下表加入试剂： 表3 温度对酶活力影响实验加样顺序 管号 1 2 3 0.5%淀粉溶液（ml） 1.5 1.5 1.5 最佳稀释度唾液（ml） 1 1 ? 煮沸过的稀释唾液（ml） ? ? 1 实验结果 摇匀后，将1、3号试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后1、2、3管均取出（将2号内液体分两半），用KI－I2溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10分钟后，再用KI－I2液实验，记录实验结果。 （三）PH对酶活力的影响 1、实验原理 酶的活力受环境PH值的影响极为显著。不同酶的最适PH不同。本实验观察PH对唾液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适PH约为6.8。 2、材料、仪器与试剂 （1）材料：新配制的溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液 （2）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴 （3）试剂：PH为5.0、5.8、6.8、8.0的缓冲溶液；KI－I2碘溶液；PH试纸 3、实验操作 表4 PH对酶活性的影响实验 PH 5 5．8 6．8 8.0 缓冲液（ml） 3 3 3 3 0.5%淀粉溶液（ml） 1 1 1 1 向第一个试管加入稀释唾液后，置于37℃的恒温水浴；等待1min后 向第二个试管加入稀释唾液，置于37℃的恒温水浴；依次类