生物酶催化氰化钠制备光学活性乳酸地研究.pdfVIP

生物酶催化氰化钠制备光学活性乳酸的研究 申世刚 李志林 单堂缓 划秀英 孙汉文 (河北省保定市河北大学化学系071002) 光学活性乳酸的聚合物具有100％的降解性．可广泛应用于制造可降解的地膜、一次 性餐具等，所以近JI,年-光学活性乳酸的需求量越来越大。目前工业上主要是用含有淀粉的 物质(大米、玉米、红薯、马铃薯、菊芋等)进行糖化后进一步发酵制得DL．-乳酸，DL- 乳酸再经复杂的化学拆分得到光学活性的乳酸：这些方法不仅消耗大量的粮食，而且整个 生产过程周期长、拆分复杂．f本研究是利用轻油裂解生产韵液体氰化钠为基础原料，在特 h ‘ ． ： 定的条件下液体氯化钠与液体乙醛溶液反应生成乳腈溶液，这样生成的是DL-乳腈，．外消 旋混合物，直接化学水解得外消旋的乳酸，但研究者们已经证明乳脯在极性溶；f!I中它可解 离出乙醛和氢氟酸，并达到平衡。本研究把这样的外消旋体系经一种特定的生物酶催化水 解L．乳腈，得到所希望的L_乳酸，k乳腈水解后，由于DL乳腈与乙醛和氢氟馥处于平衡 状态．D．乳腈又变为井消旋的DL-乳腈。这样把所有的DD-乳腈全部转化为所需要的旋光 ～ - 性乳酸成为可能。f 一、DL乳膪的合成 本文系统研究了液体氰化钠在O渤℃不同温度下强酸性阳离子交换树胎作催化荆与液 体乙醛合成DL．乳腈的反应．利用正交实验．考虑到温度、氰化钠、乙醛及催化荆的用量 的四个因数，得到温度在0-10C、氰化钠与乙醛的摩尔比为0,91-1、催化剂用量为乙醛的 2-10％时DL-乳腈转化率达95％的实验条件．溶液中的DL-乳腩含量是用高效渡相色谱仅 (日本岛津LC-6A色谱仪，色谱柱：C18，流动相：75％甲醇和2锚乙腈}眙液，检测波 长：215nm)分析得到的结果。 二、棒状杆菌属(c啦懈ba嘶响m)菌珠生物酶的培养 我们取5克含特定馓生物的物种悬浮于150毫升无菌水中．静置一定的时间，取上清 液分别放入含葡萄糖、甘油、蔗糖、硫酸铵、磷酸氢二钾营养成分的培养液中·在一定的 温度下培养一段时间，形成的菌珠和介质分离，这样得到棒状杆菌属(oorynebecterkm) 菌珠生物酶。利用正交实验改变不同的静置时间、培养渡浓度、培养温度、培养时问·得 到含菌微生物在无翦水中静置30．60分钟、3．泓的培养液浓度、28,-37C、培养时问5-7天 含菌量理想菌珠培养条件。 三、固定化酶的制作 一1071— 将特定的高分子树脂放入四径瓶中，在温度低于10C以下，搅拌缓慢加入的含棒状杆 到固定化酶，反应时间不同、反应温度不同直接影响到固定化酶的活力，固定化酶的活力 在反应时间0．2．3小时范围内随时闻的增加而增加，超过3小时后随时间的增加而降低； 反应温度在0-10C范围内固定化酶的活力基本保持不变，而超过10C随温度的增加而降 低。固定化酶活力的测定是将一定浓度的乳腈溶液流经填有此固定化酶的柱子，保持一定 的温度、酸度和保留时间，流出的液体利用高效液相色谱仪(日本岛津LC-6A色谱仪，色 谱柱：ODS，流动相：0．IM磷酸和0．1M磷酸二氢钾混合液，检测波长：215nm)分析其 中乳酸的含量，来判断活力的大小。 四、DL．乳腈的水解 将一定量的固定化酶装入玻璃柱中，用磷酸缓冲溶液进行洗涤，将制得的DL乳腈加 入一定量的磷酸缓冲液或酸性生理盐水，然后让其缓慢的通过固定化酶．固定化酶柱恒温 在3012左右，流出的液体分段收集，用柱色谱对收集渡进行分析．载体采用卜乳酸氢化酶 和辅酶I(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)，通过酶分析的方法来浏定产生的旋光性乳酸和它的旋 光度。流速、温度、磷酸缓冲液的PH值对乳腈的转化宰影响很大；实验发现；磷酸缓冲液 乳酸产率可达：80．89％。 五、结论 利用液体氰化钠在特定温度、催化剂与乙醛反应生成DD乳脯，转化率可达95％。DL- 乳腈在极性溶剂中它可解离出乙醛和氢氰酸，井达到平衡。 棒状杆菌属(oo啪eb∞tem蛐)菌珠生物酶催化水解L．乳腈，得到所希望的L-乳酸， 【广乳脯水解后，由于D．乳腈与乙醛和氢氰酸处于平衡状态。乙醛和氢氰酸与L乳腈也处于 平衡状态，D．乳腈又变为外消旋的DL-乳骑，这样把所有的DL．乳腈全都转化为所需要的