围冷冻手术期联合免疫疗法的抗肿瘤的研究.pdfVIP

圉冷冻手术期联台免疫疗法的抗肿瘤研究 555 围冷冻手术期联合免疫疗法的抗肿瘤研究 张保宁张叔人由平用春霞袁兴华扬伟志王国佩李景敏美秋平 冷冻治疗肿癌已有数十年的历史，近年来随着冷冻设备的更新，冷冻技术的完善，在准确 定位肿瘤和最大限度地杀灭肿瘤组织等方面取得了长足的进步。对不宜行肿瘤切除手术的患 者，冷冻疗法不失为治疗的又～选择。而肿瘤的生物免疫治疗也极为活跃，这是由于免疫学在 提示抗原呈递、T细胞识别、肿瘤抗原等方面有了重大突破。然而，治疗恶性肿瘤采用单纯冷 冻治疗和单纯免疫治疗疗效有限。在肿瘤围冷冻治疗期联合应用免疫治疗，充分调动两种疗 法的优势互补，在动物实验中取得了极为可喜的结果．现报告如下。 材料与方法 1．材料实验动物：C57BL／6小鼠；接种肿瘤：非免疫原性小鼠黑色素瘤B16；冷冻设备：英 (_】,IL-2，军事医学科学院四环药厂)、环磷酰胺(CTX山东齐鲁药厂)。 首先进行了预实验，包括选择实验动物及接种瘤株，确定最小成瘤量，筛选免疫制剂、最佳 配方及有效剂量，确定麻醉药品、剂量及最理想的麻醉深度，熟练掌握动物实验的冷冻外科技 术以及术中、术后有关小鼠的安全保护措施，包括最佳的冷冻时间、温度及形成冰球的面积，以 保证动物实验的成功。 鼠随机分成4组：一个实验组：冷冻免疫联合治疗组；3个对照组：单纯冷冻治疗组、单纯免疫 治疗组、生理盐水对照组。接种后第17天，肿瘤直径达3～5mm时，对实验组和单纯冷冻组 小鼠进行冷冻外科治疗，注射苯巴比妥钠进行术前麻醉，于瘤旁切开皮肤，用冷冻治疗机细探 头插人肿瘤内部进行冷冻，平均冷冻时间1．5min，冷冻温度一50℃，冰球覆盖全部肿瘤。实 验组小鼠于冷冻治疗前倒数第3天(即接种后第14天)，腹腔注射一次CTXl rng，以去除免疫 抑制。冷冻前两天于肿瘤局部每天注射一次IFN．a5万单位。冷冻治疗当天起于肿瘤局部与 腹腔每天交替注射ylL-25万单位，连续10d。冷冻治疗组和免疫治疗组分别单纯进行冷冻 治疗和免疫治疗，方法同上。生理盐水对照组不注射ETX、IFN．n和7IL-2，仅注射生理盐水。 本课题受中国医学科学院协和医辩大学院校基金(95204)资助 作者单位：100021北京。中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院(张保宁张叔人曲平 周春霞寰兴华杨伟志)；北京民航总医院(王国佩李景敏关秋平) 556 中国癌症研究进屉@ 结 果 (图1)。免疫组、冷冻组肿瘤大小明显小于注射盐水对照组，但差异无显著性(PO．05)；而实 验组与盐水对照组相比，肿瘤大小差异有显著性(PO．05)。按90d计算生存期，上述各组生 存期按顺序分别为46，53，62和71d(图2)。生理盐水对照组、免疫治疗组均无一例治愈，冷 d，生存率为 冻治疗组治愈率为14％(1／7)，而冷冻免疫联合治疗组有3只小鼠生存均超过90 50％(3／6)。实验组治愈小鼠原肿瘤部位组织切片经光镜检查未见肿瘤细胞，仅见中性粒细 胞、纤维细胞和淋巴细胞。经电镜放大4000倍、7000倍仅见大片坏死。而生理盐水对照组 镜下可见生长活跃的肿瘤细胞，其他对照组均较实验组差。以相同数量的小鼠多次重复上述 实验，结果一致。 。 45 4 ^ 3·5 永 、， —3 _j{} 色25 雉 垂： 刊 呈-5 1 0．5 0