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四种新结构类型的海洋生物活性成分抗真菌活性研究 张军东，许强芝，曹永兵，易杨华，徐铮，刘洪涛，姜远英(第二军医大学药学院，上海200433) 条纹拟海牛(Philinopsis lineolate，俗名海牛)属于棘皮动物(Phylum 我国特有的拟海牛科动物，自古作为药用，本草原始记载“昧咸，温，无毒，补肾益阳”，广泛分布于我国南 海，资源丰富，民间用于治疗胃病。其主要次生代谢产物是皂苷，皂甙是其化学防御的主要物质基础，具有抗 真菌，抗凝血、免疫调节，细胞毒和抗病毒等各种生物活性。有关条纹拟海牛化学成分的药理活性迄今笔者 C(III)， 未见报道，本实验对条纹拟海牛提取的新化合物Philinopside B(it)，Philinopside A，Philinopside PhilinopsideD(iv)的抗真菌活性进行了系统研究。 1材料与仪器 1．1材料 1．1．1菌株：ATCC标准株：白念珠菌(Candida n∞，毋． ?”dTlnS)A心2609，由长征医院菌种保存中心赠送。临床株：热带念珠菌(Candida 念珠菌(Candida parapsilosis)、申克氏孢子丝菌(Sporothrix 红色毛癣菌(TrichophytonFubwm)，均由长海医院真菌室提供，分别采自长海医院不同科室临床样本，并经 形态学和生化学鉴定。所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，深部真菌于35℃培养 一周，浅部真菌于28*(2培养2周后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上 述方法培养后于4℃保存备用。 2．0 I．I．2培养液：RPMI1640培养液：RPMll640(GibcoBRL)8 g，Nail(X)3 g，吗啡啉丙磺酸(morpholine— acid，MOPS)(Sigtrta)34．5 pmpanesulfonic g(0，165mol／L)，加三蒸水900ml溶解，1 7．0(25℃)，定容至1000ml，滤过消毒，4℃保存。 沙堡葡萄糖琼脂培养基(S【)A)：蛋白胨10 g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，调整pH至 7．0，定容至1000rnl，高压灭菌后412保存。 YEPD培养液：酵母浸膏10 g，葡萄糖20 g，蛋白胨20 菌后4℃保存。 1．1．3受试物：从条纹拟海牛中分得的4个羊毛甾烷型三萜皂甙新化合物，经鉴定分别为16t3一乙酰氧基 一3 O一[3一O一口一D一甲基吡哺葡萄糖一(1—3)一BD一吡喃木糖一(1—4)一p—D一吡喃奎诺糖一(1 2一O一磺酸钠一 乙酰氧基一3一O一[3一O一8一D一甲基吡喃葡萄糖一(1—3)一p—D一吡喃木糖(1—4) 13 一3 O_[8 D(Iv)，由本院海洋药物研究中心提供。 醇，命名为Philinopside 研室提供。 1．1．5试剂DMSO为国产分析纯，用前重蒸；其余试剂均为国产分析纯。 1．2仪器 酶标分析仪(上海第三分析仪器厂)。 2方法 2．1抗酵母菌试验 60 2．1．1菌液制备：实验前，用接种圈从4℃保存的SDA培养基上挑取新生隐球菌、热带念珠菌、白念珠菌和 近平滑念珠菌等球状菌少量，接种至1mIYEPD培养液，于37*(2，250r／min振荡培养，活化16h，使真菌处 于指数生长期，活化后，用血细胞计数板计数，以RPMI ml。 2．1．2药液制备：受试药物分别用DMSO配成25．6