猪骨形态发生蛋白15基因PCR-RFLP多态性地研究.pdfVIP

374_l史冒麴塑量佳直挫噩塞进最 蒋思文 侯振平 李凤娥 郑嵘 熊远著 (华中农业大学动物科学技术学院，武汉，430070) 摘要选择大白猪和梅山猪作为试验材料，根据人、小鼠和猪的BMPl5基因设计并合成4对引 了一个SNP位点，位于编码区第390个核苷酸处，大白猪为T，梅山猪为A，且该位点导致了限制型内切 I的PCR—RFLP多态性检 I酶切位点发生了改变。据此，建立了猪BMPl5基因基于内切酶Spe 酶Spe 测技术。利用PcR-RFLP技术，对杜洛克猪、大白I猪、大白Ⅱ猪、长白猪、中国瘦肉新品系(DIVl系、 因型频率和基因频率存在明显差异。 关键词猪；骨形成蛋白15；PCR—RFLP；产仔数 产仔数是养猪生产中最重要的经济性状之一，提高每头母猪断奶仔猪将以最小的额外投入，增加养 猪生产者的经济回报…。猪产仔数是一个遗传力低的限性性状，采用传统选择方法，直接选择产仔数 而获得遗传进展是非常困难的。法国用了30多年时间来改良这个性状，结果毫无进展；而丹麦用了50 续11代根据提高排卵率和胚胎存活率指数进行选择，初生时总产仔数和活仔数分别提高3头和 1．4头…。 assisted 分子标记辅助选择(marker selection，MAS)技术的建立和发展，给产仔数的遗传改良提供 了新的方法。在公畜和母畜发育早期，同时直接选择影响产仔数表达的基因，将提高选择的准确性和选 trait loci，QTL)，并估计它们的遗传效应。影响产仔数及其合成性状的单个基因和Q1h已见报道。产 仔数受母体排卵数和胚胎存活率直接影响，而排卵率又是一个复杂性状，受遗传和众多环境因子影响。 differentiation 卵母细胞派生因子有生长分化因子-9(growth morphogeneticprotein growth 移生长因子-B(transforming 抑制颗粒细胞FSH受体mRNA表达，从而调控卵母细胞的生长和发育”1。人、鼠、绵羊和猪的BMPl5 基因已被克隆和测序，其肽链的保守性很强。绵羊BMPl5基因突变的杂合子能增加排卵率，而突变的 纯合子则导致不育。因此，探讨BMPl5基因的遗传效应，以及与繁殖性能的关系，有可能为猪排卵率和 产仔数的标记辅助选择提供有用的分子标记。 本研究以大自猪和梅山猪作为试验材料，旨在获得猪BMPl5基因的编码区序列，发现新的SNP位 点，建立适宜的SNP分型技术及分子鉴定方法；在杜洛克猪、大白猪I、大白猪Ⅱ、长白猪、DIVl系猪、 DIV2系猪、二花脸猪和梅山猪中进行分子扫描，初步探讨BMPl5基因在品种内及品种间多态性，为产 仔数的MAS提供分子标记。 l材料和方法 1．1试验动物和基因组DNA的提取 杜洛克、大白猪I、大白猪Ⅱ、长白猪、DIVl系和DIV2系来自华中农业大学试验猪场；二花脸猪来 自江苏省无锡市厚桥种猪场。前腔静脉采血，按标准苯酚一氯仿方法提取基因组DNA”。。 1．2 PCR扩增和测序 基因编码区序列(coding R23覆盖外显子2(exon2)区域。引物由上海博亚生物技术有限公司合成，超纯水溶解，一20。C保存。 CCAC- 7；R23：3’- Gold buffer，Perkin (pH8．0，GeneAmp 二甲亚砜和0．5U Gold AmpliTaq (94。C45s、58℃45s和72℃Ivain BLAST软件进行排列和比较。 1．3 PCR-RFLP分子检测技术的建立 nucleotide 序列分析显示在exon2区域发现了一个单核苷酸多态性(single