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核酸凝胶电泳技术 Made by lionchp 一 原理 电荷效应：Q↑→V↑（可忽略） 分子筛效应：M↑→V↓（主要） 电渗：不计 →M↑ V↓ ※核酸显酸性，在缓冲液中带负电：向正极电泳 电泳速率影响因素：DNA大小、形状、带电 量 ※三种质粒电泳速率 二 三种凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳： 特点：平躺式、 影响因素 DNA构象： 镶入染料： SDS： 特点：竖式电泳，精确 SDS的作用： 脉冲场电泳： 优点：分离能力更强 原理： 三 电泳后的观察-EB染色 EB：溴乙锭，可镶嵌入，核酸的碱基对平面间对DNA染色，300nm紫外灯下发出橘黄色荧光 ※EB嵌入碱基对间，可引起DNA框移：有毒，可破坏DNA 观察方法：电泳后，300nm紫外线照射，发荧光处为DNA ※DNA量越大，荧光越强 四 电泳缓冲液要求 有缓冲液，DNA才电离：带负电，向正极移动 三种常用缓冲液： TAE：Tris-乙酸+EDTA TBE：Tris-硼酸+EDTA TPE：Tris-磷酸+EDTA 五 对照物-Marker ※本章总结 * * *