动态浊度法定量检测肝素钠注射液细菌内毒素的研究.pdfVIP

动态浊度法定量检测肝素钠注射液细菌内毒素研究 王复馨，李军，雒琪 东省立医院药刺科．III东．济南．250021) 摘要：目的：建立动态浊度法定量检测细菌内毒素含量，以控制药品质量．减少临床热原反应的发生 方法：按”中国药典2000版”附录中细菌内毒素检测法指导原则的规定Ⅲ。用动态浊度法测定肝素钠注射液细 菌内毒素含量及影响因素、结果：肝素钠注射液经10倍稀释后可应用动态浊度法定量检测，结论：用动态浊 鹰法定量检测肝素钠注射液细菌内毒素含量．结果准确，可替代家兔法。 荚键ild：动态浊度法；细菌内毒素；肝素钠 肝素钠注射液为抗凝血药．可阻抑血液的凝结过程。用于防止血栓形成。中国药典2000版规定采用家 兔法进行热原检查。但家免法干扰因素多，不易标准化，重现性差，且费用高、费时。我们应用动态浊度法 对肝素钠注射液中细菌内毒素的检测进行可行性研究，结果如下： l材料和仪器 020730，021 108，常州生化千红制药有限公司。EDS-99细菌内毒素检测仪，北京金山川科技发展有限公司。 惟内毒素， 2 方法‘j结果 动态浊度法系根据细菌内毒素与鲎试剂的(C因子)反应，被激活的凝固酶切断凝固蛋白中特定位置的 精篓C肽链形成凝固蛋白，产生的凝固蛋白逐渐形成凝胶的浊度变化，由细菌内毒素浊度仪将浊度变化信号传 八1乜子汁算机，由内置数据分析程序，计算出待测样品的细菌内毒素含量。实验方法为：将细菌内毒素标准 乘法回归处理。以测得的检查时问(T)的对数值与对应的细菌内毒素溶液浓度(C)的对数值进行回归作图 要求直线相关系数Ir I≥ 处理．．明归方程为：LogT=aLogC+b(其中a为直线的斜率，b为直线的截距) 0980以上．斜率：-0．1—-1．0之间。 2．1标准曲线的制备及可靠性试验… 用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品进行2～10倍稀释．使其最终内毒素浓度分别为5．0， o5，o．05Eu·ml。系列，各取o．1m|加入预先加有O．1ml 阿内毒素动态浊度检测仪中进行检测，其中每一浓度平行做3管。并用细菌内毒素检查用水做2管阴性对 照．“1阴性对照结果不超过标准曲线最低浓度(o 析结果见表1 表1动态浊度法标准曲线的可靠性 r r=一o．9998，相关系数f 标准曲线直线方程为：LogT=2．80566-O．25492LogC Io．98，阴性对照管在 检测时间之外．故内毒素标准曲线成立。 2．2细菌内虑素限值确定… 按公式L=K／M，式中L为供试品内毒素限值，单位Eu·u～；K为按规定的给药途径人用每公斤体重每 2000u(Kg-I,ii“)…计算得内毒素限值L=0．0025Eu·u。。。 2．3供试晶F扰试验 2．3．1供试晶最大有效稀释倍数(MVD)计算”‘ 按公式MVD=L·C／x-，其中^I为动态浊度法标准曲线最低浓度O．05 Eu-ml～，L为肝素钠注射液细菌内 Eu 毒索限值o．0025u～，C为肝素钠注射液浓度6250u·ml～，计算得供试品动态浊度法检测时最大有效稀释倍 数为312 5倍．其对应最低有效稀释浓度(MVC)为20u·ml～。 2．3．2供试牖溶液配制及干扰试验… 干扰预试验：将肝素钠注射液用细菌内毒索检查用水依次稀释为5．tO，20，40倍液(其对应有效稀释 浓度分别为1250u‘ml～，625u’ml～，312．5 m 释，但往稀释液中添加细菌内毒素，使其终浓度为x。(本实验添加终浓度为0．5Eur1)，作为样品阳性对 照管．记为BI液。细菌内毒素标准溶液制备同2 l，分别取上述各液加入预先加有0．1ml定量TA