DNA体外合成与序列测定.pptVIP

1. 合成的原理 核酸固相合成的基本原理是将所要合成的核酸链的末端核苷酸先固定在一种不溶性高分子固相载体上，然后再从此末端开始将其他核苷酸按顺序逐一接长。 每接长一个核苷酸残基则经历一轮相同的操作，由于接长的核酸链始终被固定在固相载体上，所以过量的未反应物或反应副产物可通过过滤或洗涤的方法除去。 合成至所需长度后的核酸链可从固相载体上切割下来并脱去各种保护基，再经纯化即可得到最终产物。 Sanger双脱氧链终止法 Sanger双脱氧链终止法原理 Sanger双脱氧-M13体系 DNA序列分析法 克服缺点的一种途径—DNA分子克隆 M13载体克隆DNA片段 荧光标记物 聚合反应及产物 单泳道电泳及信号收集 Maxam－ Gilbert化学修饰法的原理 Maxam－Gilbert化学修饰法优点 G反应： DMS使鸟嘌呤的7位氮原子甲基化，其后断开第8位碳原子和第9位氮原子间的化学键，哌啶置换了被修饰鸟嘌呤与核糖的结合。 G+A反应： 甲酸使嘌呤环上的氮原子质子化，削弱了腺嘌呤脱氧核糖核苷酸和鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸中的糖苷键，然后哌啶置换了嘌呤。 T+C反应： 肼断开了嘧啶环，产生的碱基片段能被哌啶所置换。 C反应： 在NaCl存在时，只有C才能与肼发生反应，随后被修饰的胞嘧啶被哌啶置换。 DNA杂交测序 杂交的检测 杂交测序的应用 DNA芯片测序 基本原理