!02=DNA重组技术=2013.ppt

1223.123 植物基因工程原理 DNA重组技术又称为基因工程（gene engineering）或分子克隆(molecular cloning)。是指通过一系列的实验技术，最终将一个生物体中的遗传信息(DNA)转入另一个生物体。 1973年由美国加利福尼亚的 S.Cohen和N.Boyer首次完善DNA重组，并得到验证。 Contents of Chapter 2 §2 常用工具酶 一、核酸酶（nuclease) 凡是能水解核酸的酶都称为核酸酶。 ①类型II RE一般都很稳定，只需Mg+2作为辅助因子，因此，加0.5Mol/L EDTA络合,可终止反应。 ③ 酶切后末端有3种 ⑤ 同裂酶： ⑦ 同尾酶：识别位点不同， 但切割后产生相同末端 不同的酶需要不同的最适Buffer，主要在离子浓度。为了方便，常采用三种缓冲体系： 　　　　高盐buffer 中盐buffer 低盐buffer 双酶切时，要先低盐buffer，后高盐。 许多公司生产各种RE，也提供最适Buffer和通用buffer。因为不同公司的buffer不同，使用时通常不能通用，因此建议固定购买一家公司的RE。 RE的1单位酶活性是指在最适温度和缓冲体系条件下1h酶切1?g λDNA的活性。具体实验时可作为决定加入酶量的依据. RE通常保存在5