时问分辨荧光法检测尿微量白蛋白方法学研究及应用.pdfVIP

维普资讯 e—一7 26 陕西医学检验第 l5眷第 l期2000年 2月 时问分辨荧光法检测尿微量白蛋白方法学研究及应用 0 I／r／～ 王跃国 黄一红 张志泉 (南通医学院附院检验科 江苏226001) ／、牛 ． z， — — — — — — 一 — — — 一 摘 要 目的：建立时问分辨荧光法(TRFIA)洲定尿微量白蛋 白的方法。方法：采用铕标记的纯化白蛋白 与尿样 中的白蛋白竞争结合抗血清的原理，在wAILAc—VICT0R 型时间分辨荧光权上测定尿微量 白 蛋 白。结果：该法检 出限为2．9mg／I，线性速200mg／I，批内变异系数为4．4 ～10．6 ，批间变异系数 为 3．9 ～10．3 ，平均回收率为 102 (范围97．2 ～108．6 )，与放射免疫法(RIA)比较相关方程为 y叭一1．04 +0．12，r一0．98l(一40)结论：TRFIA法简单 易行，铕标记物元污染，稳定时问长 (4。C，l8 rllo)，该法是临床测定尿微量白蛋白的一种有发展前逢的方法。 关键词 包楚篓茎鎏}TRFIA)尿微量白蛋白 时问分辨荧光法 (TRF1A)是以稀土元素 (钐，铕等)标 22 重量挂试验 用上述方法对高(H)、中 (M)、低 (L)三 记抗原、抗体、核酸探针等建立的技术 ．具有灵敏度高、线性 种浓度屎标本进行批 内、批问精密度试验 ．结果见表 1。 范围宽、对本底影响小、无放射性污染等优点。屎微量 白蛋 白测定可作为糖屎病性肾病的预测指标，其测定可用于调 表 1 时问分辨萤光法刹屎徽■白蛋白 整治疗 ，以延缓或预防显性蛋 白屎的进程。目前常用的方法 的批内、批 问精密度试验 有EL1SA法、免疫浊度法、放射免疫法 (R1A)等 。本文参考 文献 “设计 了时间分辨荧光法测定屎微量 白蛋白，与 R1A 相关良好 ．现报告如下； 1 材料与方法 1．1 杖嚣 WALLAC—VICTOR 型时间分辨荧光仪由芽 兰EG＆G 公司进 口。 1．2 试荆 ④人血 白蛋白(纯度 99 )：Sigma公司生产 。 2．3 田收试验 在 同份屎标本 中，分别加人舍白蛋 白25， 羊抗人白蛋 白抗体、兔抗羊 lgG抗体均购 自上海生物制 品 50，100mg／L浓度标准液 ．测得平均 回收率为 102 (范围 研究所 ；②铕标记液与增强液 ，洗涤液、PVC徽孔板 由 97．2 ～ 108．6 )。 EG j公司提供；⑨pH 9．6 O．05mmol／L碳酸钠缓冲 2．4 与旌射免疫法洲定尿徽t 白蛋 白的比较 取 40份正 液 ，5％BSA均 自己配制；④人白蛋白标准品：用 5 BSA将 常人及糖屎病病人屎(白蛋白为 1．1～98．6mg／L)．分别用 Sigma公司人血白蛋 白配制成 5．10．20．40．60．8O，120rag／ 时间分辨荧光法与RlA法测定屎微量 白蛋 白，结果表明两 L 者相关．yR 1．04x+0．12，r；0．981“：40)。 1．3 标奉来潭 56倒正常对照系本院体检的健康者 ．1l6 2．5 正常人与糖尿病痛人尿洼洲定 用本法测定了56倒 例糖屎病患者系内科住院确诊病人 正常人与 116例糖屎病病人艟机屎微量 白蛋 白及24h尿 1．4 方法 将人血 白蛋 白与铺标记液孵育 4。c过夜标 白蛋白捧泄置．结果见表 2。 记。并用SephadexG过柱纯化铕标