实验八 小鼠单细胞凝胶电泳.pptVIP

——丁书茂 单细胞凝胶电泳技术(single cell gel electrophoresis, SCGE) ，也称彗星试验(comet assay) ，是Ostling O和Johanson KJ首次提出，后经Singh等进一步完善的一种在单个细胞水平上检测DNA损伤、交联和修复的方法。因其简单、灵敏、低耗、快速等优点而广泛应用于生物检测、遗传毒理、流行病学调查等诸多方面。 一、实验原理 DNA链多为磷酸复合物，在生理条件下DNA的多聚核酸链多呈阴离子状态，当外源性因素（如紫外照射）造成DNA链断裂时，负超螺旋结构变得松散，那么在电场作用下DNA就会以一定速率向正极移动。 在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等结构受到破坏，胞内蛋白质、RNA及其它成分均扩散到溶液中，而核DNA由于分子量大而只能留在原位。 经碱处理和在碱性电解质的作用后，DNA解旋，损伤的DNA断链及其片段会被释放出来，而在电泳条件下， DNA片段可进入凝胶孔隙发生迁移。由于这些DNA分子量很小，所以在电泳过程中会离开核DNA向正极移动，形成彗星状的图像。 在一定条件下，DNA迁移距离和DNA含量分布与DNA损伤程度呈线性相关。随着DNA损伤程度加剧，断片数目增加，表现为尾部DNA含量增加，彗尾延长，荧光强度加强。 二、实验流程 采用碱性SCGE，其基本操作过程包括： 1.细胞制取 取处于对数生长期的Hela细胞，