代谢途径的调节对紫杉醇生物合成的促进作用.pdfVIP

华中理工大学学报990435 华中理工大学学报 JOURNAL OF HUAZHONG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNIOLOGY 1999年 第27卷 第4期 Vol.27 No.4 1999 代谢途径的调节对紫杉醇生物 合成的促进作用* 余龙江　李　为　梅兴国　吴元喜 摘　要　通过采用一些代谢调节剂，研究了红豆杉细胞中一些初生代谢途径以及甲瓦 龙酸 （MVA） 途径与紫杉醇生物合成的关系，并对这些调节剂的协同作用进行了工 作用都能显著提高紫杉醇的产量.此外，试验结果表明真菌诱导物对细胞的影响与Ca离 子通道变化引起的信号传导有关. 关键词　紫杉醇；生物合成；真菌诱导物；代谢调节剂 分类号　Q 81 Yu Longjiang　Li Wei　Mei Xingguo　Wu Yuanxi Abstract transduction. Keywords Yu Longjiang 　　通过激活有利于紫杉醇合成的途径并阻断不相关的途径，可以使能量和物流向有 利于紫杉醇合成的方向流动.由于红豆杉植物具有上百种紫杉烷类次生代谢产物，因 此，采用抑制剂对紫杉醇生物合成进行代谢调控以提高紫杉醇产量不仅是必要的，而 ［1］ 且是可行的.国外在抑制剂方面也开展了一些工作 .本文在以前单因子实验工作的基 华中理工大学学报990435 础上，着重考察了在真菌诱导物的作用下，一些初生代谢和次生代谢途径抑制剂协同 作用对紫杉醇生物合成的影响. 1　材料与方法 　　采用本实验室分离并继代了两年的中国红豆杉胚性细胞株E . 2 　　采用改良B 5 为0.6　mg/mL的真菌诱导物，真菌诱导物的制备方法参见文献 ［2］，细胞培养周期 为30　d. 　　选择黄豆芽提取液、丙二酸钠、硼酸及CuSO4进行四因素三水平正交试验，采用 两种添加时间，分别在细胞培养的第15　d和第22　d加入代谢调节剂.采用的培养基除 不含CuSO4 和硼酸外，其余同上所述.黄豆芽提取液制备方法是：取20　g黄豆芽，加 100　mL水及少许石英砂研磨成浆，4　000　r/min下离心收集上清液，得提取液. 　　选择 B9，EGTA，α-蒎烯和矮壮素（CCC）进行四因素三水平正交试验.采用两种 添加时间，即细胞培养的第15　d和第22　d,采用的培养基同上所述. 　　细胞培养30　d后，用布氏漏斗抽滤，蒸馏水淋洗得鲜细胞，采用药物天平称重. 紫杉醇含量测定参见文献 ［2］. 2　结果与分析 2.1　初生代谢调节剂协同作用对细胞生长及紫杉醇合成的影响 　　试验结果 (见表 1) 为两次平行试验的均值，结果计算分析见表 2. 　　由表1、表2可以看出，在第15　d时，四种调节剂的浓度变化对生物量的影响的显 著性为CuSO4 ＞丙二酸钠＞豆芽提取液＞硼酸，对紫杉醇含量的影响的显著性为丙二 酸钠•豆芽提取液＞硼酸＞CuSO4.综合试验结果和计算分析结果得出对紫杉醇合成有促 进作用的最佳组合为8号. 　　在第22　d加入时，四种调节剂对生物量的影响为CuSO 4 ＞硼酸＞丙二酸钠＞豆芽 提取液，对紫杉醇含量的影响为丙二酸钠＞豆芽提取液＞硼酸＞CuSO4.综合试验结果 和计算分析得出最佳组合为4号，8号为次佳组合. 表 1　加入初生代谢调节剂的方案设计与试验结果 因　　素 试　验　结　果 试验号 A B C D X C t