转录因子E2F-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定分析.pdfVIP

广 西 医 科 大 学 学 报 2010Apr；27(2) JOURNAL OFGUANGXIMEDICALUNIVERRSSIITY · 165 · I 转录因子 E2F一1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定 王晓通 李 雷 钱 倩 谢玉波 肖 强△ (广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科 南宁 530021) 摘要 目的：构建细胞周期相关转录因子 E2F-1RNA干扰 (RNAi)慢病毒表达载体 。方法 ：选取 E2F-1基 因的 19nt特异性序 列，设计针对 E2F-1的 shRNA序列，应用基因重组技术克隆到 pIentiLox3．7(pLL3．7)慢病毒表达载体 中，XbaI和 NotI进 行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆，在脂质体的介导下将慢病毒的混合包装载体质粒和包含 E2F-1基因RNAi的重组慢病 毒载体共转染 293FT细胞，包装成病毒 48